Anticorps monoclonal de lapin anti-Phospho-Smad5 (S463/S465) pour WB, ELISA - Q99717

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de Smad5

• SMAD5 (Mothers against decapentaplegic homolog 5, également connu sous le nom de JV5-1, MADH5) est un régulateur transcriptionnel appartenant à la famille SMAD. Il joue des rôles essentiels dans le développement embryonnaire, la différenciation cellulaire, l'angiogenèse et l'homéostasie tissulaire. Références associées : PMID:12064918 PMID:16516194

• Suite à une stimulation par le ligand BMP, SMAD5 est phosphorylé sur Ser463 et Ser465 par les récepteurs BMP de type I activés. Cette phosphorylation favorise son association avec SMAD4 pour former un complexe hétéromère qui se transloque vers le noyau, où il régule l'expression des gènes en se liant aux éléments de liaison Smad (SBEs) dans les régions promotrices. Références associées : PMID:9442019 PMID:33510867

• En plus de son rôle de facteur de transcription, la forme non phosphorylée de SMAD5 fonctionne dans le cytoplasme pour réguler le métabolisme énergétique. Elle améliore la respiration mitochondriale et la glycolyse en interagissant avec l'hexokinase 1 (HK1), accélérant ainsi la glycolyse en réponse aux changements de pH cytoplasmique. Références associées : PMID:28675158

• La protéine se localise dans le cytoplasme, le noyau et la mitochondrie, reflétant ses rôles divers dans la signalisation et le métabolisme.

• SMAD5 est exprimée de manière ubiquitaire, ce qui est cohérent avec son implication généralisée dans des processus cellulaires fondamentaux.

• Les modifications post-traductionnelles clés incluent la phosphorylation sur S463/S465 (critique pour l'activation) et l'acétylation. La protéine contient des domaines de liaison du zinc et a été confirmée par séquençage protéique direct.

Guide expérimental et conseils techniques

• L'immunogène est un peptide phosphorylé synthétique couvrant le site de double phosphorylation (S463/S465). Envisagez d'utiliser des contrôles de blocage par peptide non phosphorylé pour confirmer la spécificité de la phosphorylation en Western blot.
• Pour le Western blot, le poids moléculaire prédit est de 52 kDa. Validez la bande dans des lignées cellulaires humaines pertinentes traitées avec des ligands BMP pour induire la phosphorylation de Smad5. Des lysats non traités ou traités à la phosphatase peuvent servir de contrôles négatifs.
• Dans les applications ELISA, titrez l'anticorps pour déterminer la concentration de travail optimale. Des plaques recouvertes de phospho-peptide peuvent améliorer la spécificité.
• Étant donné que SMAD5 est ubiquitaire, assurez-vous que la préparation des échantillons et les contrôles de charge sont cohérents entre les tissus ou types cellulaires.

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