AcM phospho-Smad2-S465/S467 + Smad3-S423/S425 de lapin pour WB, ELISA - Q15796/P84022

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de SMAD2

• SMAD2 (homéologue 2 de Mothers against decapentaplegic), aussi appelé MADH2 ou MADR2, est un SMAD régulé par récepteur (R-SMAD) qui agit comme transducteur de signal intracellulaire pour les kinases du récepteur de type 1 du TGF-bêta et de l'activine.
• Après liaison du ligand, SMAD2 est phosphorylé sur les résidus sérine C-terminaux S465/S467, ce qui conduit à la formation d'un complexe avec SMAD4 et à la translocation nucléaire, où il se lie aux éléments TRE pour réguler la transcription génique.
• Il module positivement l'activité kinase de PDPK1 en favorisant sa dissociation de YWHAQ, une protéine 14-3-3 qui est un régulateur négatif clé.
• SMAD2 pourrait agir comme suppresseur de tumeur dans le cancer colorectal. Références associées : PMID:8752209
• Au niveau sous-cellulaire, SMAD2 se localise à la fois dans le cytoplasme et le noyau, avec une navette dynamique contrôlée par l'état de phosphorylation.
• L'expression tissulaire est particulièrement marquée dans le muscle squelettique, les cellules endothéliales, le cœur et le placenta.
• Les modifications post-traductionnelles telles que la phosphorylation, l'acétylation et l'ubiquitination ajustent finement l'activité et la stabilité de SMAD2.
• Cet anticorps détecte la double phosphorylation au niveau des sites S465/S467 de SMAD2 et des sites homologues S423/S425 de SMAD3, tous deux essentiels à l'activation lors de la transduction du signal du TGF-bêta.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Cet anticorps monoclonal de lapin a été obtenu contre un phosphopeptide synthétique entourant les résidus S465/S467 de SMAD2 humain, ce qui garantit sa spécificité pour l'état phosphorylé activé.
• Pour le Western blot, ajoutez des inhibiteurs de phosphatases dans les tampons de lyse pour préserver la phosphorylation de la cible. Bandes majeures attendues : ~52 kDa (SMAD2) et ~48 kDa (SMAD3) ; des bandes additionnelles à ~25, 35 et 43 kDa peuvent correspondre à des produits de clivage ou à des isoformes. Vérifiez la spécificité avec des contrôles traités à la phosphatase ou par extinction par ARNsi.
• Pour l'ELISA, envisagez de normaliser le signal phosphorylé par rapport au niveau total de SMAD2/3 à l'aide d'un anticorps pan-spécifique ; optimisez les conditions expérimentales de manière empirique.
• Une réactivité croisée a été observée avec les protéines humaines, de souris et de rat ; confirmez les niveaux de phosphorylation endogène dans votre système expérimental avec une stimulation appropriée par le TGF-bêta.

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