Anticorps polyclonal de lapin anti-Phospho-Smad2-S465/467 + Smad3-S423/425 pour WB, IF/ICC, IHC-P, ELISA - Q15796 / P84022

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de SMAD2 et SMAD3

• SMAD2 est une SMAD régulée par les récepteurs (R-SMAD) qui agit comme un transducteur de signal intracellulaire pour les voies TGF-bêta et activine.
• Après liaison du ligand, les kinases des récepteurs de type 1 phosphorylent SMAD2 au niveau du motif SSXS C-terminal (Ser465 et Ser467), déclenchant son activation, la formation de complexes avec SMAD4 et la translocation nucléaire.
• Dans le noyau, le complexe SMAD2/SMAD4 se lie à l'élément sensible au TGF-bêta (TRE) dans les promoteurs des gènes cibles et régule la transcription.
• SMAD2 peut fonctionner comme un suppresseur de tumeur dans le carcinome colorectal. Références associées : PMID:8752209
• Il est fortement exprimé dans le muscle squelettique, les cellules endothéliales, le cœur et le placenta.
• SMAD3 est un homologue proche de SMAD2 et partage des mécanismes d'activation similaires. L'anticorps détecte la phosphorylation aux sites correspondants Ser423/425 dans SMAD3.
• Les modifications post-traductionnelles clés incluent la phosphorylation, l'acétylation et l'ubiquitination ; SMAD2 contient également un site de liaison au zinc.

Guide expérimental et conseils techniques

• L'immunogène est un phosphopeptide synthétique ciblant le motif de double phosphorylation, offrant une spécificité pour les formes activées de SMAD2 et SMAD3. Vérifier la spécificité phospho en utilisant des échantillons traités à la phosphatase.
• Pour le Western blot, inclure des inhibiteurs de phosphatases pendant la lyse pour préserver la phosphorylation, et envisager d'utiliser des échantillons frais. Les poids moléculaires prédits de SMAD2 et SMAD3 sont d'environ 48-52 kDa, mais plusieurs bandes peuvent apparaître en raison de la phosphorylation et des isoformes.
• Pour l'immunofluorescence et l'immunohistochimie, une fixation standard avec du PFA à 4 % et une perméabilisation avec du Triton X-100 peuvent être appropriées ; optimiser la récupération antigénique pour l'IHC-P.
• L'ELISA peut être utilisé pour le criblage à haut débit de l'activation de la voie TGF-bêta ; des tests de réactivité croisée sont conseillés pour les études multi-espèces.
• Toujours inclure des contrôles positifs et négatifs appropriés (par exemple, cellules traitées au TGF-bêta vs non traitées) pour confirmer la spécificité phospho.

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