Ac monoclonal de lapin anti-Phospho-Smad2 (S245/S250/S255) pour WB et ELISA - Q15796

Spécifications et paramètres clés du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de SMAD2

• SMAD2 (homologue 2 de Mothers against decapentaplegic) est un SMAD régulé par récepteur (R-SMAD) qui agit comme transducteur de signal intracellulaire et modulateur transcriptionnel pour les kinases de type 1 récepteur du TGF-beta (facteur de croissance transformant) et de l'activine.
• Après phosphorylation sur son motif SXS C-terminal (résidus sérine 465 et 467), SMAD2 forme un complexe avec SMAD4 et se translocate vers le noyau où il se lie à l'élément répondant au TGF-beta (TRE) sur les promoteurs des gènes cibles pour réguler la transcription.
• SMAD2 régule positivement l'activité kinase de PDPK1 en stimulant sa dissociation de la protéine inhibitrice 14-3-3 YWHAQ.
• Il est décrit comme un suppresseur de tumeur dans le cancer colorectal. Références associées : PMID:8752209
• Au niveau sous-cellulaire, SMAD2 navette entre le cytoplasme et le noyau, ce qui est cohérent avec son rôle dans la transduction du signal.
• La protéine est exprimée à des niveaux élevés dans le muscle squelettique, les cellules endothéliales, le cœur et le placenta.
• Les modifications post-traductionnelles incluent la phosphorylation, l'acétylation et l'ubiquitination, qui régulent son activité, sa stabilité et ses interactions.
• L'épissage alternatif génère plusieurs isoformes, et la protéine contient un domaine de liaison à l'ion zinc (domaine MH1) qui médie la liaison à l'ADN.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• Cet anticorps a été généré contre un peptide phosphorylé ; les tampons de lyse des échantillons doivent contenir des inhibiteurs de phosphatases (par exemple orthovanadate de sodium, fluorure de sodium) pour conserver l'état de phosphorylation pendant la préparation.
• Pour le Western blot, prévoyez de séparer à la fois des lysats cellulaires non traités et stimulés par le TGF-β/l'activine pour confirmer les décalages de bande dépendants de l'activation.
• Une dilution de départ recommandée pour WB est 1:500–1:2000, mais la concentration optimale doit être déterminée de manière empirique dans votre système d'échantillon spécifique.
• En ELISA, l'utilisation d'un tampon de blocage à faible activité phosphatasique peut réduire le bruit de fond ; prévoyez un test compétitif par peptide phosphorylé pour vérifier la spécificité.
• En tant qu'anticorps monoclonal de lapin, utilisez un anticorps secondaire anti-IgG de lapin (H+L) conjugué à la HRP ou à l'AP pour la détection.

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