Phospho-Raf1-S338 Lapin pAb pour WB, IHC-P, ELISA - P04049

Spécifications et paramètres clés du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de Raf1

• RAF1 code pour la sérine/thréonine-protéine kinase Raf-1 (également appelée c-RAF), un transducteur critique de la voie de signalisation RAS-RAF-MEK-ERK qui régit la prolifération cellulaire, la différenciation, l'apoptose et la transformation oncogénique.
• L'activation de Raf1 nécessite une phosphorylation sur Ser338 (et Ser339) par PAK1, ce qui déclenche une cascade de kinases : Raf1 phosphoryle et active MEK1/2, qui à leur tour phosphorylent ERK1/2.
• La Raf1 phosphorylée (p-Ser338) phosphoryle également directement BAD sur Ser75, inhibant sa fonction pro-apoptotique et favorisant la survie cellulaire.
• Raf1 est distribuée dans plusieurs compartiments cellulaires — cytoplasme, membrane cellulaire, mitochondries et noyau — permettant une signalisation dépendante du contexte ; la Raf1 mitochondriale se lie à BCL2 pour bloquer l'apoptose.
• Dans le muscle squelettique, l'isoforme 1 de Raf1 est plus abondante que l'isoforme 2, suggérant une régulation spécifique au tissu.
• Des mutations dans RAF1 sont associées au syndrome de Noonan et à la cardiomyopathie hypertrophique, et le gène est un proto-oncogène bien établi fréquemment hyperactivé dans les cancers humains.
• Les modifications post-traductionnelles clés comprennent la phosphorylation sur sérine/thréonine/tyrosine, la méthylation et l'ubiquitination, qui régulent finement l'activité et la stabilité de Raf1.

Guide expérimental et conseils techniques

• L'immunogène est un peptide phosphorylé synthétique autour de Ser338 ; ainsi, l'anticorps reconnaît spécifiquement Raf1 uniquement lorsqu'elle est phosphorylée sur ce site. Pour le western blot, incluez des inhibiteurs de phosphatases dans les tampons de lyse et envisagez de traiter les échantillons avec de l'EGF ou du sérum pour stimuler la phosphorylation.
• Pour l'IHC-P, vérifiez la spécificité phospho en comparant la coloration avec et sans traitement à la phosphatase ; les conditions de récupération d'antigène peuvent nécessiter une optimisation pour les épitopes phosphorylés.
• Cet anticorps est validé pour le WB, l'IHC-P et l'ELISA. Lors de la réalisation d'un ELISA quantitatif, utilisez des contrôles appropriés de peptide phospho et non-phospho pour confirmer la spécificité.
• Réagit de manière croisée avec la Raf1 humaine, murine et de rat selon les données du fournisseur ; validez dans le système d'échantillon souhaité pour garantir des performances constantes.

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