Anticorps Polyclonal de Lapin Phospho-POLR2A CTD-T4 pour WB, IP, ELISA, ChIP - P24928

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de POLR2A

• POLR2A code pour la plus grande sous-unité de l'ARN polymérase II (Pol II), une protéine d'environ 217 kDa qui sert de cœur catalytique pour la synthèse d'ARN dépendante de l'ADN, essentielle à la production d'ARNm et d'ARN non codants. Références associées : PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:30190596
• Le domaine C-terminal (CTD) de POLR2A est constitué de 52 répétitions en tandem de l'heptapeptide (YSPTSPS) qui subissent une phosphorylation dynamique, principalement sur Ser2 et Ser5, pour réguler l'initiation, l'élongation et la terminaison de la transcription, ainsi que le traitement co-transcriptionnel de l'ARN. Références associées : PMID:24207025, PMID:26124092
• POLR2A contient un motif DxDGD qui coordonne les ions Mg2+ essentiels à l'addition des nucléotides, et possède également une activité exonucléase 3'-5' pour la relecture, assurant une haute fidélité transcriptionnelle. Références associées : PMID:8381534, PMID:9852112
• Principalement localisée dans le noyau et sur les chromosomes, POLR2A a également été détectée dans le cytoplasme, reflétant son transport dynamique et ses rôles multifacettes.
• Les modifications post-traductionnelles, y compris la phosphorylation de sérine/thréonine, l'acétylation, la méthylation et l'ubiquitination de lysine, modulent l'activité et la stabilité de la Pol II.
• L'épissage alternatif génère de multiples isoformes, et des mutations dans POLR2A sont associées à des troubles neurodéveloppementaux, soulignant son importance clinique.
• Fonctionne également comme une ARN polymérase dépendante de l'ARN, prolongeant les ARN non codants, et agit comme une réplicase pour le virus de l'hépatite delta lors de l'infection.

Guide expérimental et conseils techniques

• Étant donné que l'immunogène est un peptide phospho-spécifique correspondant à T4 des répétitions CTD de POLR2A, validez la spécificité de l'anticorps en utilisant une compétition avec un peptide non phosphorylé ou des lysats cellulaires traités à la phosphatase pour confirmer la dépendance à la phosphorylation.
• Pour le transfert Western (WB), en raison de la grande taille de la protéine (~217 kDa), envisagez d'utiliser des gels SDS-PAGE à faible pourcentage (par exemple, 6-8 %) et des temps de transfert prolongés pour assurer un transfert efficace de la POLR2A pleine longueur.
• L'application ChIP peut nécessiter une optimisation des conditions de réticulation et de fragmentation de la chromatine ; testez différentes méthodes de fragmentation (par exemple, sonication ou digestion enzymatique) pour obtenir des fragments de chromatine de 200 à 500 pb.
• Dans les expériences d'immunoprécipitation (IP) et d'ELISA, incluez des contrôles positifs et négatifs appropriés, tels que des lysats de lignées cellulaires connues pour exprimer POLR2A (par exemple, HeLa, HEK293) et, si disponibles, des mutants défectueux pour la phosphorylation.

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