Phospho-POLR2A CTD- S2/S5 Lapin pAb - P24928

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de POLR2A

• La sous-unité RPB1 de l'ARN polymérase II dirigée par l'ADN est le composant catalytique central de l'ARN polymérase II (Pol II), responsable de la synthèse des précurseurs d'ARNm et de nombreux ARN non codants fonctionnels. Références connexes : PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:30190596
• Le cycle de transcription de la Pol II se déroule par les étapes d'initiation, d'élongation et de terminaison, l'enzyme formant le centre actif avec la deuxième plus grande sous-unité POLR2B/RPB2. Références connexes : PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:28108474
• POLR2A ajoute des nucléotides via un mécanisme dépendant du Mg(2+) et possède une activité de relecture exonucléasique 3' -> 5' pour corriger les ribonucléotides mal incorporés. Références connexes : PMID:30190596, PMID:8381534, PMID:9852112
• Le domaine C-terminal unique (CTD), composé de 52 répétitions d'heptapeptides, sert de plate-forme pour la régulation de la transcription ; la phosphorylation sur Ser5 médie l'évasion du promoteur, tandis que la phosphorylation sur Ser2 est nécessaire pour la libération de la pause et le traitement du pré-ARNm. Références connexes : PMID:24207025, PMID:26124092
• La méthylation et l'acétylation du CTD régulent également l'expression des gènes : l'acétylation est liée à l'induction des gènes à réponse immédiate, tandis que la méthylation réprime l'expression des gènes cibles.
• La localisation subcellulaire comprend le noyau, le cytoplasme et le chromosome, ce qui est cohérent avec ses rôles dans la transcription et le traitement de l'ARN.
• POLR2A fonctionne également comme une ARN polymérase dépendante de l'ARN, étendant les ARN non codants et agissant comme réplicase pour le virus de l'hépatite delta.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène est un peptide synthétique conçu autour des sites de phosphorylation S2/S5 de la répétition YSPTSPS du CTD POLR2A, suggérant que l'anticorps pourrait reconnaître à la fois Ser2 et Ser5 phosphorylés.
• Pour le Western blot, en raison du poids moléculaire élevé (~217 kDa), envisagez d'utiliser des gels SDS-PAGE à faible pourcentage (par exemple, 6-8 %) et des temps de transfert prolongés ; l'inclusion d'inhibiteurs de phosphatases dans le tampon de lyse est recommandée pour maintenir la phosphorylation.
• La spécificité peut être évaluée en traitant les échantillons avec la phosphatase lambda ou par des essais de compétition peptidique.
• Dans ELISA, utilisez des plaques enrobées de peptides phosphorylés et confirmez la réactivité avec des contrôles de peptides non phosphorylés pour évaluer la sélectivité phospho.
• Cet anticorps est indiqué pour des échantillons humains ; la réactivité croisée avec d'autres espèces n'a pas été rapportée, il est donc conseillé de valider dans le système d'échantillon pertinent adéquat.

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