Phospho-PLN-S16 pAb Lapin pour WB et ELISA - P26678

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de la phospholambane

• La phospholambane (PLN) est une phosphoprotéine transmembranaire de 6,1 kDa qui inhibe de manière réversible la Ca2+-ATPase SERCA2 dans le réticulum sarcoplasmique cardiaque en réduisant l'affinité apparente de la pompe pour le Ca2+, régulant ainsi la contractilité et la relaxation cardiaques (PubMed:28890335). Références associées : PMID:28890335
• La PLN se lie préférentiellement à la conformation E1 liée à l'ATP de SERCA2, qui prédomine à de faibles concentrations diastoliques de Ca2+, et perturbe l'activation allostérique par l'ATP pour ralentir la recapture du Ca2+ pendant la diastole.
• Au-delà de SERCA2, la PLN inhibe également SERCA3 et a été impliquée dans l'homéostasie calcique dans les spermatides allongées et le noyau réticulaire thalamique, affectant potentiellement la différenciation des cellules germinales et les comportements veille/sommeil.
• La phosphorylation de la PLN sur Ser16 (et Thr17) par des protéines kinases telles que la PKA et la CaMKII inverse l'inhibition de SERCA2, servant de nœud régulateur critique dans la signalisation β-adrénergique et la contractilité cardiaque.
• Au niveau subcellulaire, la PLN réside dans la membrane du réticulum sarcoplasmique/endoplasmique et dans la membrane mitochondriale, ancrant ses fonctions régulatrices dans les organites de gestion du calcium.
• La PLN est exprimée principalement dans le muscle cardiaque ; les mutations de la PLN provoquent des cardiomyopathies héréditaires, y compris la cardiomyopathie dilatée (CMD1P) et la cardiomyopathie hypertrophique (CMH18).
• La protéine subit de multiples modifications covalentes - palmitoylation, acétylation et phosphorylation - qui influencent son état oligomérique, son ancrage membranaire et son activité régulatrice.

Guide expérimental et conseils techniques

• L'immunogène est un phosphopeptide synthétique correspondant aux résidus autour de la Ser16 de la PLN humaine ; cette conception enrichit la sélection d'anticorps reconnaissant l'épitope phosphorylé. Pour l'ELISA et le Western blot, envisagez d'utiliser un peptide non phosphorylé ou des lysats traités à la phosphatase comme contrôles négatifs pour confirmer la spécificité de la phosphorylation.
• En raison du faible poids moléculaire de la PLN (~6 kDa), les conditions SDS-PAGE standard peuvent ne pas bien résoudre la protéine ; des gels à pourcentage élevé (par exemple, 15–20 %) ou le gel Tricine-SDS-PAGE sont recommandés pour la détection en Western blot.
• L'anticorps présente une réactivité croisée avec la PLN de souris et de rat comme indiqué ; validez la détection de la PLN phosphorylée endogène dans les lysats de tissu cardiaque de ces espèces, car la PLN est fortement exprimée dans le cœur.
• Pour l'ELISA, la nature polyclonale de lapin peut permettre une capture/détection sensible ; cependant, la cohérence entre les lots doit être vérifiée pour les dosages quantitatifs.
• Étant donné que la phosphorylation de la PLN est régulée dynamiquement, une préparation d'échantillon appropriée avec des inhibiteurs de phosphatases est essentielle pour préserver le signal phospho-S16.

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