mAb de lapin anti-Phospho-PKA RIIα (PRKAR2A)-S99 pour WB et ELISA - P13861

Spécifications et paramètres clés du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de PRKAR2A

• PRKAR2A code pour la sous-unité régulatrice alpha de type II de la protéine kinase dépendante de l'AMPc, un composant clé de l'holoenzyme PKA qui module les réponses cellulaires à l'AMPc.
• En tant que sous-unité régulatrice de la PKA, elle se lie à l'AMPc, ce qui entraîne la dissociation et l'activation des sous-unités catalytiques, qui phosphorylent ensuite des cibles en aval impliquées dans le métabolisme, l'expression génique et la prolifération cellulaire.
• Les sous-unités régulatrices de type II médient l'association membranaire en se liant aux protéines d'ancrage de la kinase A (AKAP), dont la kinase MAP2, localisant ainsi l'activité de la PKA dans des compartiments sous-cellulaires spécifiques.
• Le génome humain contient quatre types de sous-unités régulatrices (I-alpha, I-beta, II-alpha et II-beta) ; PRKAR2A appartient à la classe II-alpha, et son expression varie selon les tissus, étant constitutive dans certains et inductible dans d'autres.
• PRKAR2A est principalement localisée dans le cytoplasme et peut s'associer à la membrane cellulaire par l'intermédiaire d'interactions avec les protéines d'ancrage, permettant un contrôle spatial de la signalisation par l'AMPc.
• La protéine subit des modifications post-traductionnelles, notamment la phosphorylation sur plusieurs sites (par exemple Ser99) et l'acétylation, qui régulent son activité, sa stabilité ou son interaction avec ses partenaires.
• L'épissage alternatif génère différents isoformes, et la protéine est classée sous des mots-clés tels que Phosphoprotéine, Acétylation et Liaison à l'AMPc, ce qui reflète ses rôles régulateurs dynamiques.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène est un phosphopeptide synthétique autour du Ser99 ; envisagez de vérifier la phospho-spécificité en comparant les signaux entre échantillons traités et non traités ou en utilisant un contrôle de blocage par un peptide non phosphorylé.
• Pour le Western blotting, une bande proche de 46 kDa est attendue ; optimisez le blocage et la dilution de l'anticorps dans votre système d'échantillon concerné, car l'expression endogène peut varier.
• En ELISA, utilisez l'anticorps pour détecter le PRKAR2A phosphorylé dans des lysats cellulaires ou tissulaires ; incluez des contrôles positifs et négatifs appropriés pour confirmer la spécificité du test.
• La réactivité croisée est confirmée pour l'humain et le rat ; si vous utilisez des échantillons de souris, validez la réactivité croisée expérimentalement en raison d'éventuelles différences de séquence.
• Étant donné le rôle essentiel de la PKA dans la signalisation, la phosphorylation au niveau du Ser99 peut être dynamique ; envisagez de stimuler ou d'inhiber les voies de l'AMPc lors de la conception de vos expériences.

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