Anticorps monoclonal lapin Phospho-p70 S6 Kinase 1-T421/S424 pour WB, IF/ICC, ELISA - P23443

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de RPS6KB1 (p70 S6 Kinase 1)

• RPS6KB1 (p70 S6 kinase 1) est une sérine/thréonine kinase qui fonctionne comme un effecteur en aval clé de la voie de signalisation mTOR, régulant la croissance, la prolifération et la survie cellulaires. Références connexes : PMID:11500364, PMID:12801526, PMID:14673156
• La kinase est activée par une phosphorylation multi-sites, la phosphorylation médiée par mTORC1 à Thr-421/Ser-424 (située dans le domaine auto-inhibiteur) jouant un rôle critique dans son activation. Lors d'une stimulation mitogène, cette phosphorylation déclenche la dissociation du complexe d'initiation de la traduction EIF3 et l'activation ultérieure de la kinase. Références connexes : PMID:16286006
• Elle favorise la synthèse des protéines en phosphorylant des composants de la machinerie de traduction, notamment EIF4B, RPS6 et EEF2K, et améliore l'initiation de la traduction en inactivant le répresseur EIF4A, PDCD4. Références connexes : PMID:11500364, PMID:12801526, PMID:14673156, PMID:17053147
• RPS6KB1 participe à la régulation de rétroaction de la signalisation mTOR en phosphorylant les composants de mTORC2 MAPKAP1/SIN1 et RICTOR, ainsi que le composant de mTORC1 DEPTOR, modulant ainsi l'activité d'AKT1. Références connexes : PMID:15899889, PMID:19720745, PMID:19935711, PMID:22017876
• Elle médie la survie cellulaire en phosphorylant et en inhibant la protéine pro-apoptotique BAD, et en régulant la dynamique du complexe mitochondrial URI1-PPP1CC. Références connexes : PMID:17936702
• Au niveau subcellulaire, elle se localise dans le cytoplasme, le noyau, les mitochondries et la membrane mitochondriale externe, ainsi que dans les compartiments synaptiques, reflétant ses divers rôles régulateurs.
• La protéine est largement exprimée dans les tissus humains, soulignant son rôle fondamental dans l'homéostasie cellulaire.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Pour le Western blot, une bande d'environ 59 kDa est attendue. Validez la spécificité en utilisant des lysats traités à la phosphatase ou par compétition avec un peptide non phosphorylé.
• En immunofluorescence, optimisez les conditions de fixation et de perméabilisation pour préserver l'épitope phosphorylé ; envisagez de tester des traitements de privation sérique et de stimulation pour visualiser les changements de localisation dépendants de l'activation.
• Pour les applications ELISA, revêtir avec le peptide phospho-cible ou utiliser un format sandwich pour capturer et détecter le phospho-p70 S6K, en veillant à ce que l'anticorps de détection reconnaisse la phosphorylation spécifique.
• Lors de l'extension des applications aux échantillons de souris ou de rat, vérifiez la réactivité croisée dans le tissu ou la lignée cellulaire concerné, car l'homologie de séquence peut influencer la liaison.
• La conception de l'immunogène (peptide phospho-synthétique autour de T421/S424) assure la spécificité phospho ; confirmez toujours en traitant les échantillons avec la phosphatase lambda ou en utilisant un contrôle d'anticorps non-phospho.

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