PolymAb® de lapin anti-Phospho-NFKB1-S337 pour WB - P19838

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de NFKB1

• NFKB1 code pour le précurseur p105, qui subit un traitement médié par le protéasome pour générer la sous-unité active p50 du complexe du facteur de transcription NF-κB (PubMed:1423592). Références associées :
  PMID:1423592

• La sous-unité p50 forme des homo- ou hétérodimères avec d'autres membres de la famille NF-κB/Rel tels que RELA/p65, RELB et REL, se liant à la séquence consensus d'ADN κB 5'-GGRNNYYCC-3' pour réguler l'expression des gènes (PubMed:1740106, PubMed:7830764). Références associées :
  PMID:1740106
  PMID:7830764

• NF-κB est un médiateur central des réponses immunitaires et inflammatoires, de la croissance cellulaire, de la différenciation et de l'apoptose, l'hétérodimère p65-p50 étant le complexe le plus abondant et activant la transcription.

• Les dimères inactifs de NF-κB sont retenus dans le cytoplasme par les inhibiteurs IκB ; après stimulation, IκB est phosphorylé et dégradé, permettant à NF-κB de transloquer vers le noyau et d'activer les gènes cibles.

• NFKB1 fonctionne également comme une ancre de rétention cytoplasmique via p105 pour les protéines NF-κB associées et, en complexe avec MAP3K8, réprime la signalisation MAPK jusqu'à ce que la dégradation de p105 libère MAP3K8 active.

• La protéine est soumise à de multiples modifications post-traductionnelles, notamment la phosphorylation, l'acétylation, l'ubiquitination et l'hydroxylation, qui modulent son activité, sa stabilité et sa localisation subcellulaire.

• La localisation subcellulaire comprend à la fois le cytoplasme et le noyau, reflétant son double rôle dans le séquestrage du signal et la régulation transcriptionnelle.

• Les isoformes alternatifs produits par épissage alternatif contribuent à la diversité fonctionnelle ; la protéine p105 de pleine longueur (105 kDa) et la sous-unité traitée p50 (50 kDa) sont détectées dans la plupart des types cellulaires.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Étant donné la nature phospho-spécifique de cet anticorps, il est essentiel d'inclure des inhibiteurs de phosphatases dans les tampons de lyse pour préserver le signal de phosphorylation pendant la préparation des échantillons.
• Pour le Western blot, un contrôle positif avec une activation connue de la voie NF-κB (par exemple, des cellules traitées au TNF-α) est recommandé ; la détection des bandes autour de 105 kDa (p105) et 50 kDa (p50) doit être vérifiée.
• En immunohistochimie, les conditions de récupération d'antigène et la dilution de l'anticorps doivent être optimisées ; assurez-vous que le modèle de coloration reflète la localisation nucléaire/cytoplasmique attendue après activation de la voie.
• L'anticorps est adapté à l'ELISA ; envisagez d'utiliser un peptide phosphorylé comme standard pour les dosages quantitatifs.

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