Anticorps Polyclonal de Lapin Phospho-NFKB1 (S337) pour WB, ELISA - P19838

Spécifications et Paramètres Principaux du Produit

Contexte Biologique : Fonction et Localisation de NFKB1

• Le gène NFKB1 code pour le précurseur p105, qui subit un traitement co- et post-traductionnel médié par le protéasome pour générer la sous-unité active p50. La p50 forme des homo- ou hétérodimères avec d'autres membres de la famille NF-κB (RELA, RELB, REL, NFKB2). Références associées : PMID:1423592
• L'hétérodimère p65-p50 est le complexe NF-κB le plus abondant et agit comme un activateur transcriptionnel en se liant aux sites consensus κB (5′-GGRNNYYCC-3′) dans les amplificateurs des gènes de la réponse immunitaire et de phase aiguë. Références associées : PMID:1740106 PMID:7830764
• L'homodimère p50-p50 fonctionne comme un répresseur transcriptionnel mais peut passer à un activateur lorsqu'il est associé à BCL3. La protéine NFKB1 p105 retient également les protéines NF-κB dans le cytoplasme, contrôlant ainsi leur translocation nucléaire.
• La signalisation NF-κB est étroitement régulée par des modifications post-traductionnelles, notamment la phosphorylation, l'acétylation, la S-nitrosylation et l'ubiquitination. NFKB1 est une phosphoprotéine ; les événements de phosphorylation modulent sa stabilité, son traitement et son activité transcriptionnelle.
• NFKB1 est largement exprimé, en particulier dans les cellules immunitaires, et joue un rôle central dans l'inflammation, l'immunité, l'apoptose et la prolifération cellulaire.
• La protéine se localise principalement dans le cytoplasme dans les cellules au repos. Lors de l'activation et de la dégradation des inhibiteurs IκB, les dimères libérés transloquent vers le noyau pour induire l'expression des gènes cibles.

Conseils Expérimentaux et Techniques

• L'immunogène est un peptide phosphorylé synthétique autour de la S337 du NFKB1 humain. Pour préserver le signal de phosphorylation lors de la préparation des échantillons, incluez des inhibiteurs de phosphatases dans les tampons de lyse et évitez les incubations prolongées à températures élevées.
• Pour le Western blot, attendez-vous à des bandes majeures à ~50 kDa (sous-unité p50) et ~105 kDa (précurseur p105). En raison de la réactivité croisée avec les orthologues de souris et de rat, il peut être utilisé chez ces espèces, mais la dilution optimale doit être déterminée empiriquement.
• L'anticorps a été validé pour le WB et l'ELISA. Lors de la réalisation d'un ELISA, envisagez un format en sandwich ou une conception de dosage compétitif, et vérifiez la spécificité à l'aide de témoins de peptides non phosphorylés.
• L'activation de NF-κB peut être induite par un large éventail de stimuli (par exemple, TNF-α, LPS, IL-1β). Dans la mesure du possible, incluez des témoins positifs provenant de cellules stimulées et un échantillon déphosphorylé ou traité à la phosphatase pour confirmer la dépendance à la phosphorylation.

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