Anticorps monoclonal de lapin anti-Phospho-NF-kB p65/RelA-S536 pour WB, ELISA - Q04206

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation du facteur de transcription p65

• Identité protéique et formation de complexes : Le facteur de transcription p65 (RELA) est une sous-unité clé du complexe facteur de transcription NF-kB. Il forme des homo- ou hétérodimères avec d'autres protéines de la famille NF-kB/Rel ; l'hétérodimère RELA-NFKB1 est le plus abondant et agit comme un activateur transcriptionnel.
• Rôles biologiques principaux : NF-kB régule un large éventail de processus biologiques, notamment l'inflammation, l'immunité, la différenciation cellulaire, la prolifération et l'apoptose. Il est essentiel pour l'expression des gènes des cytokines dans les lymphocytes T.
  Références associées : PMID:15790681
• Réponse antivirale : RELA fonctionne comme un facteur de transcription clé dans la réponse à l'interféron lors de l'infection par le SARS-CoV-2.
  Références associées : PMID:33440148
• Localisation subcellulaire et activation : Dans les cellules non stimulées, NF-kB est séquestré dans le cytoplasme par les protéines inhibitrices I-kB. Après stimulation, l'I-kB est phosphorylé par l'IKK et dégradé, libérant RELA pour qu'il se transloque dans le noyau et active la transcription des gènes cibles.
• Phosphorylation sur Ser536 : La phosphorylation de RELA sur Ser536 est une modification post-traductionnelle critique qui améliore son activité transcriptionnelle, favorise sa localisation nucléaire et peut moduler les interactions avec des coactivateurs.
• Autres modifications et interactions avec l'hôte : En plus de la phosphorylation, RELA est modifié par acétylation, méthylation, ubiquitination et S-nitrosylation, et participe aux interactions hôte-virus.

Guide expérimental et conseils techniques

• Cet anticorps a été produit contre un phosphopeptide synthétique correspondant aux résidus entourant Ser536 de RELA humaine ; il est censé reconnaître spécifiquement la forme phosphorylée de la protéine.
• Pour le Western blot (WB), envisagez de stimuler les cellules avec des activateurs connus de NF-kB (par exemple, TNF-α, LPS) pour induire la phosphorylation de Ser536. Incluez des inhibiteurs de phosphatases dans les tampons de lyse pour préserver l'épitope phospho.
• Validez la spécificité du signal phospho en comparant des échantillons stimulés et non stimulés, ou en traitant les lysats avec de la phosphatase lambda avant le WB.
• Pour les applications ELISA, optimisez les conditions du dosage pour la détection des protéines phospho et envisagez d'utiliser un anticorps de détection phospho-spécifique pour garantir la spécificité.
• Il est rapporté que cet anticorps présente une réactivité croisée avec RELA de souris et de rat ; confirmez la réactivité avec les lysats appropriés de ces espèces.

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