mAb de lapin anti-Phospho-NF-κB p105-S932 pour WB, ELISA - P19838

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de NF-κB p105

• Le gène NFKB1 code pour la protéine précurseur p105, qui est traitée par protéolyse pour générer la sous-unité active p50 du complexe du facteur de transcription NF-κB (PubMed:1423592). Références associées : PMID:1423592
• La sous-unité p50 s'associe à RELA/p65 pour former l'hétérodimère p65-p50, le complexe NF-κB le plus abondant, qui se lie aux sites κB (5'-GGRNNYYCC-3') sur les promoteurs des gènes cibles pour activer la transcription (PubMed:1740106, PubMed:7830764). Références associées : PMID:1740106, PMID:7830764
• NF-κB est un facteur de transcription pléiotropique central pour la réponse immunitaire, l'inflammation, l'apoptose et la prolifération cellulaire, régulé par les protéines inhibitrices IκB et divers stimuli.
• La protéine p105 contient un domaine d'homologie Rel (RHD) N-terminal et des répétitions ankyrine C-terminales ; elle fonctionne comme facteur de rétention cytoplasmique pour les dimères de NF-κB, les séquestrant à l'état inactif.
• Après des signaux d'activation, les kinases IκB (IKK) phosphorylent IκB, conduisant à sa dégradation et à la libération des dimères de NF-κB, qui se translocuent ensuite dans le noyau pour moduler l'expression génique.
• Les homodimères p50 agissent comme répresseurs transcriptionnels sauf s'ils s'associent à BCL3, ce qui met en évidence la polyvalence régulatrice spécifique des dimères de NF-κB.
• Les modifications post-traductionnelles, notamment la phosphorylation, l'acétylation, l'ubiquitination et la S-nitrosylation, ajustent finement l'activité de NF-κB ; la phosphorylation sur les résidus sérine (par exemple S932) est impliquée dans le traitement et l'activation de p105.
• La localisation sous-cellulaire est majoritairement cytoplasmique pour p105, tandis que les dimères actifs contenant p50 navettent entre le cytoplasme et le noyau.

Conseils expérimentaux et techniques

• L'immunogène est un phosphopeptide synthétique correspondant aux résidus autour de Ser932 du NF-κB p105 humain. Pour le Western blot, attendez une bande principale à environ 105 kDa (p105) et éventuellement une bande à environ 50 kDa (p50). Validez la spécificité de phosphorylation en traitant les lysats avec une phosphatase ou en comparant avec un anticorps non phospho-spécifique.
• Pour les applications ELISA, déterminez le titre et optimisez la concentration de l'anticorps en utilisant le peptide phosphorylé ou des lysats de cellules stimulées. Ajoutez des étapes de blocage appropriées pour réduire la liaison non spécifique.
• Compte tenu de la réactivité croisée de l'anticorps avec la souris et le rat, envisagez d'utiliser des lignées cellulaires pertinentes (par exemple Jurkat, HeLa, RAW 264.7) comme contrôles positifs. L'induction de la voie de signalisation NF-κB par du TNF-α, du LPS ou du PMA/ionomycine peut améliorer la détection.
• Incluez toujours des marqueurs de poids moléculaire et des contrôles appropriés pour confirmer la spécificité, car les membres de la famille NF-κB partagent des similarités.

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