mAb de lapin anti-Phospho-MLKL-S345 pour WB, IP, ELISA - Q9D2Y4

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de la protéine MLKL (Mixed lineage kinase domain-like protein)

• La protéine MLKL (Mixed lineage kinase domain-like protein) est une pseudokinase essentielle à la mort cellulaire par nécroptose. Une isoforme d'épissage alternatif pourrait exister.
• La MLKL est l'effecteur terminal de la nécroptose induite par le TNF. Après phosphorylation par RIPK3, elle forme des homotrimères, se transloque vers la membrane plasmique et déclenche un influx de calcium ainsi que la rupture de la membrane plasmique, exécutant ainsi la nécrose programmée. Références associées : PMID:23835476, PMID:24012422, PMID:24019532
• Malgré son domaine de type kinase, la MLKL est dépourvue d'activité protéine kinase et fonctionne comme une pseudokinase. Références associées : PMID:24012422
• En réponse à une infection par un orthomyxovirus, la MLKL nucléaire peut être activée par ZBP1 et RIPK3, entraînant une rupture de l'enveloppe nucléaire et la fuite d'ADN immunogène dans le cytosol. Références associées : PMID:32200799, PMID:32296175
• La MLKL est principalement cytoplasmique mais peut s'associer à la membrane cellulaire et au noyau en fonction de son état d'activation.
• La MLKL est fortement exprimée dans le thymus, le côlon, l'intestin, le foie, la rate et les poumons, avec des niveaux plus faibles dans les muscles squelettiques, le cœur et les reins, et est absente dans le cerveau.
• La MLKL contient un domaine "coiled-coil" et un site de liaison à l'ATP, bien qu'elle ne présente pas d'activité kinase. C'est une phosphoprotéine régulée par de multiples événements de phosphorylation.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène est un phospho-peptide synthétique correspondant au site S441 de la MLKL de souris ; confirmez la spécificité de l'anticorps en traitant les échantillons avec de la lambda phosphatase ou en utilisant une compétition avec un peptide non phosphorylé.
• Pour le Western blot, une bande d'environ 54 kDa est attendue. Utilisez des contrôles positifs appropriés tels que des lysats de cellules de souris traitées avec un stimulus nécroptotique (par exemple, TNF+ZVAD+mimétique de SMAC).
• En immunoprécipitation, un pré-nettoyage et l'optimisation des ratios anticorps:lysat sont recommandés pour réduire le bruit de fond.
• La performance en ELISA peut dépendre des conditions de revêtement ; testez les formats ELISA direct et sandwich.

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