pAb de lapin anti-Phospho-MAP2K4-T261 - P45985

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de MAP2K4

• MAP2K4 (aussi appelée MEK4, MKK4, SEK1, JNKK1, parmi d'autres alias) est une protéine kinase à double spécificité qui agit comme un composant clé de la cascade de signalisation des protéines kinases activées par les mitogènes (MAP).
• C'est une kinase essentielle de la voie des kinases activées par le stress / kinases N-terminales de c-Jun (SAP/JNK), qui phosphoryle et active directement les JNK (MAPK8/JNK1, MAPK9/JNK2, MAPK10/JNK3) ainsi que les p38 MAPK (MAPK11, MAPK12, MAPK13, MAPK14).
• MAP2K4 phosphoryle préférentiellement le résidu tyrosine dans le motif Thr-Pro-Tyr des JNK, tandis que MAP2K7 cible le résidu thréonine ; ensemble, ils activent synergiquement les JNK en réponse à divers stimuli.
• Cette kinase est nécessaire pour maintenir l'homéostasie lymphoïde périphérique et intervient dans la signalisation de mort mitochondriale, notamment la libération de cytochrome c conduisant à l'apoptose.
• La localisation sous-cellulaire comprend à la fois le cytoplasme et le noyau, ce qui est cohérent avec son rôle dans la transduction du signal de la surface cellulaire vers le noyau.
• MAP2K4 est largement exprimée dans tous les tissus, avec une expression particulièrement abondante observée dans le muscle squelettique.
• La protéine subit plusieurs modifications post-traductionnelles, notamment l'acétylation, la méthylation et la phosphorylation, qui régulent son activité, et elle est soumise à un épissage alternatif.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• En tant qu'anticorps phospho-spécifique obtenu contre un peptide phosphorylé synthétique autour de Thr261, il est essentiel d'inclure des inhibiteurs de phosphatases dans les tampons de lyse pour préserver l'état de phosphorylation de la MAP2K4 endogène lors de la préparation des échantillons.
• Validez la spécificité de l'anticorps en traitant les lysats cellulaires avec de la lambda phosphatase ; une déphosphorylation réussie doit supprimer le signal si l'anticorps reconnaît strictement la forme phosphorylée T261.
• Pour le western blot, le poids moléculaire attendu est d'environ 44 kDa ; utilisez des pourcentages de gel et des conditions de transfert adaptés à cette gamme de taille.
• La réactivité croisée est prédite pour l'homme, la souris et le rat sur la base de l'homologie de séquence de la région immunogène ; cependant, une vérification dans l'espèce étudiée est recommandée.
• Pour les applications ELISA, envisagez d'utiliser cet anticorps comme réactif de capture ou de détection, et optimisez empiriquement les conditions de revêtement et de détection avec des standards de peptide ou de protéine phosphorylés.

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