Phospho-IRE1-S724 Lapin pAb - O75460

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'IRE1

• IRE1 (également connu sous le nom d'ERN1, IRE1α) est une sérine/thréonine-protéine kinase et endoribonucléase à double fonction qui agit comme capteur principal de la réponse aux protéines mal repliées du réticulum endoplasmique (UPR). Références associées : PMID:11175748, PMID:11779464, PMID:12637535
• Dans les cellules non stressées, l'IRE1 est maintenue dans un état inactif monomérique par sa liaison à la chaperonne du RE HSPA5/BiP. Références associées : PMID:21317875
• Lors de l'accumulation de protéines mal repliées, HSPA5/BiP se dissocie, permettant l'homodimérisation de l'IRE1 et la trans-autophosphorylation du domaine kinase, ce qui active la fonction endoribonucléase. Références associées : PMID:21317875
• Le domaine endoribonucléase clive spécifiquement l'ARNm de XBP1, excisant un intron de 26 nucléotides pour générer le XBP1 épissé (XBP1s). Références associées : PMID:11779464, PMID:21317875, PMID:24508390
• XBP1s code un facteur de transcription puissant qui augmente l'expression des gènes impliqués dans le repliement des protéines du RE, le contrôle qualité et la dégradation, rétablissant ainsi l'homéostasie du RE. Références associées : PMID:11779464, PMID:21317875, PMID:24508390
• Au-delà de l'épissage de XBP1, l'IRE1 régule également les voies de sécrétion protéique non conventionnelles, telles que le trafic induit par le stress du RE du CFTR vers la membrane cellulaire via GORASP2 et SEC16A. Références associées : PMID:21884936, PMID:28067262
• IRE1 est exprimé de manière ubiquitaire, avec des niveaux particulièrement élevés dans le tissu pancréatique, ce qui reflète la forte demande sécrétoire des cellules pancréatiques.
• En tant que protéine membranaire du réticulum endoplasmique, le domaine luminal N-terminal de l'IRE1 détecte le stress du RE, tandis que sa région cytosolique C-terminal abrite les activités kinase et endoribonucléase.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Cet anticorps est dirigé contre un peptide phosphorylé correspondant à la région S724 de l'IRE1α humaine. Pour vérifier la spécificité de la phosphorylation, envisagez un traitement à la λ-phosphatase des échantillons avant l'analyse par Western blot.
• Pour le WB, l'IRE1 migre à environ 110 kDa. Assurez-vous d'un blocage complet de la membrane et incluez des témoins positifs appropriés (lysats de cellulaires soumises à un stress du RE) et négatifs (cellules non stressées) pour confirmer l'identité de la bande.
• En IHC-P, les conditions de récupération de l'antigène peuvent nécessiter une optimisation. Incluez un témoin isotypique et validez les motifs de coloration par rapport à la distribution tissulaire connue de l'IRE1.
• Une réactivité croisée avec l'IRE1 de souris et de rat est rapportée ; cependant, un alignement de la séquence de l'épitope autour de S724 est recommandé pour confirmer la conservation chez ces espèces.
• En tant qu'anticorps polyclonal de lapin, les performances peuvent varier d'un lot à l'autre. Validez chaque nouveau lot dans votre système d'essai spécifique pour assurer la cohérence.

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