Phospho-IRAK4-Ser346 Rabbit mAb pour WB, ELISA - Q9NWZ3

Spécifications et paramètres clés du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'IRAK4

• IRAK4 (kinase 4 associée au récepteur de l'interleukine-1), également connu sous le nom d'antigène du carcinome rénal NY-REN-64, est codé par le gène IRAK4. Il existe plusieurs isoformes dues à l'épissage alternatif.
• IRAK4 est une sérine/thréonine kinase essentielle pour l'initiation des réponses immunitaires innées contre les pathogènes. Elle fonctionne en aval des récepteurs Toll-like (TLR) et d'IL-1R, étant rapidement recrutée au complexe Myddosome via MYD88. Références connexes : PMID:17878374
• Lors de l'activation, IRAK4 phosphoryle IRAK1, stimulant son activité kinase et son autophosphorylation. Il phosphoryle également les ligases E3 d'ubiquitine Pellino (PELI1, PELI2, PELI3) pour promouvoir la polyubiquitination liée à K63 d'IRAK1, conduisant à l'activation des complexes TAK1 et IKK et à la translocation nucléaire de NF-κB.
• IRAK4 phosphoryle également TIRAP pour promouvoir son ubiquitination et sa dégradation, et phosphoryle NCF1 pour réguler l'activité de la NADPH oxydase lors de la stimulation par LPS, contribuant aux réponses antimicrobiennes.
• Principalement localisé dans le cytoplasme.
• IRAK4 subit une phosphorylation et une acétylation, qui sont critiques pour son activation et sa fonction.
• Les mutations d'IRAK4 sont associées à des troubles d'immunodéficience (ex: IPD1, IMD67) et au carcinome rénal (NY-REN-64), soulignant son rôle dans la défense immunitaire et le cancer.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Puisque cet anticorps est spécifique de la Ser346 phosphorylée, incluez des inhibiteurs de phosphatases lors de la préparation des échantillons pour le western blot afin de préserver le signal de phosphorylation.
• L'immunogène est un phosphopeptide synthétique ; envisagez d'utiliser un peptide non phosphorylé comme témoin négatif pour confirmer la liaison dépendante de la phosphorylation.
• Pour le western blot, le poids moléculaire prédit est d'environ 52 kDa. Assurez-vous d'un chargement adéquat en protéines et utilisez des témoins positifs appropriés, tels que des cellules immunitaires stimulées.
• Pour les applications ELISA, développez un protocole de détection spécifique du phospho-site ; le couplage avec un anticorps anti-IRAK4 total peut permettre une analyse rationnelle des niveaux de phosphorylation.
• Validez l'anticorps dans le système d'échantillons humains pertinent, car la réactivité croisée avec d'autres espèces n'a pas été déterminée.
• Optimisez la dilution de l'anticorps et les conditions d'incubation pour votre configuration expérimentale spécifique.

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