Anticorps pAb de lapin Phospho-eIF4EBP1-T45 pour Western Blot - Q13541

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de eIF4EBP1

• Le facteur d'initiation de la traduction eucaryote 4E-binding protein 1 (eIF4EBP1, également connu sous le nom de PHAS-I) est un répresseur clé de l'initiation de la traduction dépendante de la coiffe. Il appartient à la famille des protéines liant eIF4E et entre en compétition avec eIF4G pour la liaison à eIF4E, empêchant ainsi l'assemblage du complexe eIF4F.
• L'activité répresseur de eIF4EBP1 est régulée par son état de phosphorylation : eIF4EBP1 hypophosphorylé se lie fortement à eIF4E et inhibe la traduction, tandis que l'hyperphosphorylation (par exemple, sur Thr45 et d'autres sites) le dissocie de eIF4E, permettant la formation du complexe eIF4F et l'initiation de la traduction.
• eIF4EBP1 médie la régulation de la synthèse protéique en aval de divers stimuli, notamment les hormones, les facteurs de croissance et les nutriments, par les voies de signalisation MAP kinase et mTORC1. La phosphorylation sur Thr45 est un événement critique précoce dans la cascade séquentielle de phosphorylation multi-sites.
• La localisation subcellulaire est principalement cytoplasmique, mais eIF4EBP1 peut également transiter vers le noyau, où il peut avoir des rôles réglementaires supplémentaires.
• Les modifications post-traductionnelles incluent l'acétylation, l'ubiquitination (formation de liaison isopeptidique) et une phosphorylation étendue sur plusieurs résidus. Le poids moléculaire calculé de la protéine non modifiée est d'environ 12,5 kDa, avec une migration sur SDS-PAGE souvent observée autour de 13–15 kDa selon l'état de phosphorylation.
• eIF4EBP1 est largement exprimé et joue un rôle central dans le contrôle de la croissance cellulaire, de la prolifération et de la survie. La dysrégulation de sa phosphorylation est impliquée dans le cancer et les troubles métaboliques.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène utilisé est un peptide phospho-synthétique couvrant le Thr45, indiquant que cet anticorps est conçu pour reconnaître spécifiquement la forme phosphorylée Thr45 de eIF4EBP1. La réactivité croisée avec eIF4EBP1 non phosphorylé ou d'autres membres de la famille est peu probable mais doit être évaluée dans des systèmes modèles pertinents.
• Pour le Western blot, assurez-vous que les lysats protéiques sont préparés en présence d'inhibiteurs de phosphatases pour préserver l'état de phosphorylation. Une bande à environ 13–15 kDa est attendue pour eIF4EBP1 humain ; le poids moléculaire apparent peut varier légèrement en fonction des niveaux globaux de phosphorylation.
• Incluez des contrôles appropriés pour valider la spécificité de l'anticorps, tels que des lysats non traités versus traités à la phosphatase, ou des lysats de cellules avec une activité mTORC1 modulée (par exemple, privation de serum/stimulation à l'insuline).
• Les performances de l'anticorps dans d'autres applications (par exemple, IHC, IF, IP) n'ont pas été décrites ; des tests préliminaires sont recommandés s'il est utilisé en dehors du WB.

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