mAb de lapin anti-Phospho-eIF4EBP1-T37/T46 pour WB et ELISA - Q13541

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de eIF4EBP1

• eIF4EBP1 (protéine de liaison 1 au facteur d'initiation de la traduction eucaryotique 4E), également appelée PHAS-I, est un répresseur clé de l'initiation de la traduction.
• Elle régule l'activité d'EIF4E en entrant en compétition avec EIF4G1/EIF4G3 pour la liaison à EIF4E. Sous sa forme hypophosphorylée, elle se lie fortement à EIF4E et inhibe la traduction dépendante de la coiffe. L'hyperphosphorylation, déclenchée par des signaux de croissance, provoque sa dissociation d'EIF4E, permettant l'assemblage du complexe eIF4F et l'initiation de la traduction.
• Elle agit comme effecteur en aval des voies mTORC1 et des kinases MAP, médiant la synthèse protéique en réponse aux hormones, aux facteurs de croissance et aux nutriments.
• Elle est localisée à la fois dans le cytoplasme et le noyau, ce qui est cohérent avec son rôle dans la modulation de la traduction et éventuellement des fonctions nucléaires.
• Elle subit de nombreuses modifications post-traductionnelles, notamment la phosphorylation (par exemple aux niveaux T37, T46, T70, S65), l'acétylation et l'ubiquitination (répertoriée comme liaison isopeptidique et conjugaison Ubl), qui régulent collectivement son activité et sa stabilité.
• Son poids moléculaire calculé à partir de sa séquence est d'environ 13 kDa (12580 Da), bien que sa migration sur SDS-PAGE puisse varier selon les états de phosphorylation.
• Elle est classée comme inhibiteur de la synthèse protéique et phosphoprotéine, appartient à la famille des régulateurs de la traduction ; elle est également identifiée dans les études protéomiques comme composant du protéome de référence.

Conseils expérimentaux et techniques

• Cet anticorps reconnaît les niveaux endogènes de eIF4EBP1 uniquement lorsqu'il est phosphorylé aux thréonines 37 et 46.
• Pour le Western blot, ajoutez des inhibiteurs de phosphatases dans les tampons de lyse pour préserver les signaux de phosphorylation. La bande principale migre généralement autour de 13-20 kDa ; plusieurs bandes peuvent apparaître du fait d'une phosphorylation différentielle.
• Validez le signal phospho-spécifique en traitant les cellules avec des stimuli (par exemple insuline, sérum) pour induire la phosphorylation, et utilisez éventuellement un traitement à la phosphatase ou une compétition avec un peptide non phosphorylé.
• Pour l'ELISA, optimisez les conditions de revêtement et la concentration de l'anticorps ; envisagez d'associer cet anticorps à un anticorps anti-eIF4EBP1 total pour la normalisation.
• La réactivité croisée a été démontrée chez l'homme et le rat ; pour la souris, malgré l'homologie de séquence, la réactivité n'est pas indiquée dans nos données ; une validation sur échantillons de souris peut être nécessaire.

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