Anticorps monoclonal de lapin Phospho-eIF4EBP1 (S65) pour WB, ELISA - Q13541

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation d'eIF4EBP1

• eIF4EBP1 (protéine de liaison au facteur 4E d'initiation de la traduction eucaryote 1), également connue sous le nom de PHAS-I, fonctionne comme un répresseur clé de l'initiation de la traduction dépendante de la coiffe en se liant au facteur d'initiation eucaryote 4E (eIF4E).
• Dans son état hypophosphorylé, eIF4EBP1 entre en compétition avec eIF4G (eIF4G1 et eIF4G3) pour la liaison à eIF4E, empêchant ainsi l'assemblage du complexe eIF4F et inhibant l'initiation de la traduction.
• L'hyperphosphorylation d'eIF4EBP1, souvent médiée par la voie mTORC1, induit sa dissociation d'eIF4E, permettant la formation du complexe eIF4F et l'activation de la traduction.
• eIF4EBP1 intègre les signaux des hormones, des facteurs de croissance et des nutriments via les voies de signalisation MAP kinase et mTOR pour contrôler la synthèse des protéines et la croissance cellulaire.
• C'est une phosphoprotéine présentant plusieurs sites de phosphorylation, dont la Ser65, qui modulent son affinité pour eIF4E et sa capacité à réguler la traduction.
• À l'échelle subcellulaire, eIF4EBP1 se localise à la fois dans le cytoplasme et le noyau, ce qui est cohérent avec ses rôles dans le contrôle de la traduction et éventuellement dans le transport nucléo-cytoplasmique.
• La protéine est modifiée post-traductionnellement par acétylation et conjugaison de type ubiquitine (Ubl) en plus de la phosphorylation, soulignant des mécanismes réglementaires complexes.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Comme cet anticorps cible un site de phosphorylation spécifique (Ser65), confirmez la spécificité de la détection en traitant les lysats cellulaires avec la phosphatase lambda ou en comparant les signaux de type sauvage par rapport aux mutants déficients en phosphorylation.
• Pour le Western blot, utilisez des procédures standard mais assurez-vous que les tampons de lyse contiennent des inhibiteurs de phosphatases pour préserver les états de phosphorylation. Un agent de blocage tel que le BSA peut aider à réduire la liaison non spécifique typique des anticorps phospho-spécifiques.
• Dans l'ELISA, envisagez de revêtir avec l'immunogène peptidique comme témoin positif et incluez un peptide non phosphorylé pour vérifier la phospho-spécificité.
• L'activation de mTORC1 (par exemple, par stimulation à l'insuline ou au sérum) augmente la phosphorylation de la Ser65, tandis que l'inhibition (par exemple, rapamycine) la diminue ; incluez des témoins de stimulation ou d'inhibition appropriés dans vos expériences.

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