pAb lapin Phospho-EGFR-Y998 pour WB, ELISA - P00533

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'EGFR

• L'EGFR est un récepteur tyrosine kinase qui se lie aux ligands de la famille EGF, activant plusieurs cascades de signalisation pour convertir les signaux extracellulaires en réponses cellulaires appropriées.
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• Les ligands connus incluent l'EGF, le TGFA/TGF-alpha, l'AREG, l'épigène/EPGN, le BTC/bétacelluline, l'épiréguline/EREG et le HBEGF/EGF liant l'héparine.
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• La liaison du ligand déclenche l'homo‑ et l'hétérodimérisation du récepteur ainsi que l'autophosphorylation sur des résidus cytoplasmiques clés, ce qui recrute des protéines adaptatrices comme GRB2 et active des cascades en aval incluant les modules RAS‑RAF‑MEK‑ERK, PI3K‑AKT, PLCgamma‑PKC et STAT.
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• L'EGFR peut également activer la cascade de signalisation NF‑kappa‑B et phosphoryler directement d'autres protéines comme RGS16 et MUC1, reliant sa signalisation aux voies des récepteurs couplés aux protéines G et aux interactions avec la bêta-caténine.
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• L'EGFR régule positivement la migration cellulaire par interaction avec CCDC88A/GIV, qui retient l'EGFR à la membrane et favorise la signalisation déclenchant la migration cellulaire.
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• L'EGFR se localise sur la membrane cellulaire, la membrane du réticulum endoplasmique, la membrane de l'appareil de Golgi, la membrane nucléaire, la membrane des endosomes et dans le noyau ; une forme sécrétée a également été identifiée.

• Il est exprimé de manière ubiquitaire dans les tissus humains ; l'isoforme 2 est également exprimée dans les cancers de l'ovaire et peut agir comme antagoniste de l'action de l'EGF.

Conseils expérimentaux et techniques

• Cet anticorps polyclonal de lapin a été obtenu contre un peptide phosphorylé synthétique correspondant aux résidus autour du Y998 de l'EGFR humain. Il est prévu qu'il reconnaisse la forme phosphorylée de l'EGFR au niveau de ce site.
• Pour le Western blot (WB), une bande d'environ 134 kDa est prédite pour la protéine EGFR pleine longueur. Envisagez d'utiliser des inhibiteurs de phosphatases appropriés lors de la préparation des échantillons pour préserver la phosphorylation.
• Pour l'ELISA, l'anticorps peut être utilisé pour détecter l'EGFR phosphorylé ; envisagez d'utiliser un peptide non phosphorylé comme contrôle négatif pour confirmer la phospho-spécificité.
• L'anticorps est validé pour les échantillons humains. La réactivité croisée avec d'autres espèces n'a pas été déterminée ; si vous l'appliquez à d'autres espèces, validez-la expérimentalement.
• Comme pour tout anticorps phospho-spécifique, la cohérence entre lots et les dilutions de travail optimales doivent être déterminées empiriquement dans le système d'échantillon concerné.

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