Anticorps Polyclonal de Lapin Phospho-Chk1-S317 (WB, ELISA) - O14757

Spécifications et Paramètres Principaux du Produit

Contexte Biologique : Fonction et Localisation de Chk1

• La sérine/thréonine-protéine kinase Chk1 (CHEK1) est une kinase de point de contrôle du cycle cellulaire essentielle qui assure l'intégrité du génome en médiant l'arrêt du cycle cellulaire et la réparation de l'ADN en cas de dommages à l'ADN ou de stress de réplication. Références associées : PMID:11535615, PMID:12399544, PMID:12446774
• Chk1 phosphoryle CDC25A, CDC25B et CDC25C, conduisant à leur inhibition via la liaison aux protéines 14-3-3 ou la dégradation protéasomale, empêchant ainsi l'activation des CDK-cyclines et bloquant la progression du cycle cellulaire. Références associées : PMID:12676583, PMID:12676925, PMID:12759351, PMID:9278511, PMID:19734889, PMID:20090422
• Elle phosphoryle directement RAD51 sur Thr-309 pour promouvoir la réparation par recombination homologue, TP53 sur plusieurs sites C-terminaux pour améliorer son activation et l'arrêt du cycle cellulaire, et FANCE pour faciliter la réparation des pontages interbrins de l'ADN. Références associées : PMID:15665856, PMID:10673501, PMID:15659650, PMID:16511572, PMID:17296736
• Chk1 phosphoryle TLK1 sur Ser-743, empêchant la phosphorylation d'ASF1A et améliorant l'assemblage de la chromatine, et régule également PCNA pour le maintien de la fourche de réplication. Références associées : PMID:12660173, PMID:12955071, PMID:18451105
• De plus, Chk1 phosphoryle l'histone H3.1 (H3T11ph) pour réprimer épigénétiquement des gènes, phosphoryle RB1 pour promouvoir l'interaction avec E2F, et cible SPRTN et PABIR1/FAM122A pour moduler le stress de réplication et le point de contrôle G2/M. Références associées : PMID:17380128, PMID:31316063, PMID:33108758
• Un variant d'épissage endogène agit comme un répresseur de la Chk1 pleine longueur, antagonisant sa fonction pour promouvoir la transition de la phase S vers G2/M.
• Au niveau subcellulaire, Chk1 se localise dans le noyau, sur les chromosomes, dans le cytoplasme et au niveau des centrosomes, avec un enrichissement au centrosome pendant la mitose.
• Exprimée de manière ubiquitaire, avec les niveaux les plus élevés dans le thymus, le testicule, l'intestin grêle et le côlon.

Conseils Expérimentaux et Astuces Techniques

• L'immunogène est un phosphopeptide synthétique autour de Ser317 ; assurez-vous que la préparation des échantillons inclut des inhibiteurs de phosphatases pour préserver la phosphorylation endogène à ce site.
• Pour le Western blot, une bande spécifique à ~54 kDa est attendue. Validez la spécificité en traitant les lysats cellulaires avec de la phosphatase lambda ou en utilisant des anticorps anti-Chk1 non phospho-spécifiques comme contrôles.
• En ELISA, utilisez le peptide immobilisé ou des lysats cellulaires et envisagez un blocage avec des peptides phosphorylés versus non phosphorylés pour confirmer la spécificité phospho.
• Optimisez la dilution de l'anticorps pour votre système expérimental spécifique ; les dilutions de départ typiques pour le WB sont de 1:500 à 1:2000, mais une détermination empirique est recommandée.
• La réactivité croisée a été confirmée pour les échantillons humains ; pour d'autres espèces, vérifiez l'homologie de séquence autour de Ser317 et testez expérimentalement.

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