Anticorps Monoclonal de Lapin Phospho-CDK1-T161+CDK2/CDK3-T160 pour WB, IP, IF - P06493

Spécifications et Paramètres Principaux du Produit

Contexte Biologique : Fonction et Localisation du CDK1

• La kinase dépendante des cyclines 1 (CDK1, également connue sous le nom de CDC2/p34) est une sérine/thréonine kinase hautement conservée qui sert de régulateur principal du cycle cellulaire eucaryote, pilotant la transition G2-M et coordonnant l'entrée et la progression mitotique (PubMed:16407259, PubMed:16933150, PubMed:17459720). Références associées : PMID:16407259 PMID:16933150 PMID:17459720
• L'activité du CDK1 est étroitement contrôlée par la liaison aux cyclines et la phosphorylation : l'activation nécessite la phosphorylation du T161 par le complexe kinase d'activation du CDK (CAK) (CDK7/cycline H/MAT1), tandis que la phosphorylation inhibitrice sur T14 et Y15 est médiée par WEE1 et PKMYT1 ; la déphosphorylation par les phosphatases CDC25 à la limite G2-M déclenche une activation soudaine (PubMed:18480403, PubMed:20360007, PubMed:2188730). Références associées : PMID:18480403 PMID:20360007 PMID:2188730
• Une fois activé, le CDK1 phosphoryle plus d'une centaine de substrats en aval pour orchestrer les événements mitotiques, y compris la phosphorylation des lamines conduisant à la désintégration de l'enveloppe nucléaire, la phosphorylation des protéines associées aux microtubules pour l'assemblage du fuseau, et la phosphorylation de l'histone H1 pour la condensation des chromosomes (PubMed:2188730, PubMed:2344612, PubMed:37788673). Références associées : PMID:2188730 PMID:2344612 PMID:37788673
• Au niveau subcellulaire, le CDK1 se localise dynamiquement dans le noyau, le cytoplasme, les mitochondries, les centrosomes et le fuseau mitotique, reflétant ses divers rôles fonctionnels lors de la progression du cycle cellulaire.
• Le CDK1 régule également les facteurs de transcription (par exemple, FOXO1), les protéines apoptotiques (par exemple, Bcl-xL, caspase 8) et les modificateurs épigénétiques (par exemple, EZH2), reliant le contrôle du cycle cellulaire aux décisions sur le destin cellulaire et aux réponses aux dommages à l'ADN (PubMed:18356527, PubMed:19917720, PubMed:20937773, PubMed:20935635). Références associées : PMID:18356527 PMID:19917720 PMID:20937773 PMID:20935635
• Le CDK1 est essentiel pour le développement embryonnaire précoce et sa dysrégulation est fréquemment observée dans le cancer, où il peut être surexprimé ou hyperactivé, contribuant à une prolifération incontrôlée (PubMed:18480403, PubMed:20360007). Références associées : PMID:18480403 PMID:20360007
• De plus, le CDK1 sert de récepteur pour l'entrée du virus de l'hépatite C (VHC) dans les hépatocytes, suggérant un rôle au-delà de la régulation du cycle cellulaire.

Conseils Expérimentaux et Astuces Techniques

• L'immunogène est un phosphopeptide synthétique ciblant le T161 phosphorylé du CDK1 humain, un résidu conservé dans la boucle d'activation. On s'attend à ce que l'anticorps reconnaisse la forme activée (phosphorylée sur T161) du CDK1 et potentiellement réagisse de manière croisée avec le T160 phosphorylé de CDK2 et CDK3 en raison de l'homologie de séquence.
• Pour le Western blot, traitez les lysats cellulaires avec des inhibiteurs de phosphatases pour préserver l'état de phosphorylation. Le poids moléculaire prédit est d'environ 34 kDa ; surveillez les décalages de bandes ou les changements d'intensité après traitement avec une phosphatase pour confirmer la spécificité phospho-spécifique.
• Dans l'immunoprécipitation, le pré-nettoyage avec un IgG témoin et l'utilisation de conditions de lyse non dénaturantes peuvent améliorer la détection des complexes CDK1.
• Pour l'immunofluorescence et l'immunohistochimie, les méthodes de perméabilisation et de fixation doivent être optimisées ; l'anticorps peut détecter des motifs de coloration nucléaire, cytoplasmique et centrosomal en fonction de la phase du cycle cellulaire.
• Les applications de Dot blot et ELISA peuvent être utilisées pour le dépistage à haut débit des niveaux de phospho-CDK1 dans les échantillons.

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