Phospho-CDK1-T161 Lapin pAb - P06493

Spécifications et paramètres clés du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation du CDK1

• Le CDK1 (également connu sous le nom de CDC2) est une sérine/thréonine-protéine kinase essentielle pour la transition G2-M du cycle cellulaire, phosphorylant de nombreux substrats pour déclencher les événements mitotiques. Références connexes : PMID:16407259, PMID:16933150, PMID:17459720
• Son activation nécessite une phosphorylation au Thr161 par le complexe kinase d'activation du CDK (CAK), tandis que la phosphorylation inhibitrice au Thr14 et Tyr15 par WEE1 et PKMYT1 le maintient inactif ; la déphosphorylation par les phosphatases CDC25 déclenche l'entrée en mitose. Références connexes : PMID:18480403, PMID:20360007, PMID:2188730, PMID:41100585
• Le CDK1 phosphoryle les lamines nucléaires (LMNA, LMNB1, LMNB2) provoquant la désintégration de l'enveloppe nucléaire lors de la mitose. Références connexes : PMID:2188730, PMID:2344612, PMID:37788673
• En cas de dommages à l'ADN, le CDK1 est inactivé via PKR/WEE1 pour imposer l'arrêt G2, et réactivé après réparation par la signalisation WIP1/CDC25. Références connexes : PMID:20360007, PMID:20395957
• Le CDK1 se localise dans plusieurs compartiments sous-cellulaires, notamment le noyau, le cytoplasme, la mitochondrie, le centrosome et le fuseau mitotique, permettant la coordination de divers processus mitotiques.
• Le CDK1 participe à la régulation de l'horloge circadienne en phosphorylant NR1D1, le marquant pour dégradation ; il agit également comme récepteur pour l'entrée du virus de l'hépatite C dans les hépatocytes. Références connexes : PMID:27238018

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Puisque cet anticorps cible un site de phosphorylation (Thr161), maintenez le statut phosphorylé lors de la préparation des échantillons en incluant des inhibiteurs de phosphatases et en évitant le chauffage dans des tampons sans phosphate.
• Pour le Western blot, une bande d'environ 34 kDa est attendue ; envisagez d'utiliser des lysats de cellules mitotiques (par exemple, des cellules arrêtées en G2/M) comme témoins positifs et un traitement à la phosphatase lambda comme témoin négatif.
• Dans l'immunoprécipitation, les performances de l'anticorps peuvent dépendre de l'abondance de l'épitope phosphorylé ; enrichissez les cellules mitotiques pour améliorer la détection.
• Pour l'immunofluorescence et l'IHC, un démasquage standard des antigènes couplé à une fixation rapide peut préserver le signal de phosphorylation ; des expériences pilotes pour optimiser la détection sont recommandées.
• Bien que répertorié pour ELISA, un revêtement direct de l'antigène avec le phosphopeptide peut être nécessaire ; un ELISA compétitif peut être conçu pour quantifier les niveaux de phosphorylation.

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