Anticorps polyclonal de lapin Phospho-BRD4 (S492/S494) pour WB, DB, ELISA - O60885

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de BRD4

• BRD4 est un membre de la famille bromodomaine et extraterminal (BET), il fonctionne comme un lecteur de chromatine qui se lie aux histones acétylées pour transmettre la mémoire épigénétique à travers les divisions cellulaires. Références associées : PMID:20871596, PMID:23086925, PMID:23317504
• Il reste associé à la chromatine acétylée tout au long du cycle cellulaire, maintenant une structure de chromatine d'ordre supérieur pour la transcription génique en phase G1 post-mitotique. Références associées : PMID:22334664, PMID:23317504, PMID:23589332
• BRD4 recrute le complexe P-TEFb sur les promoteurs géniques et les enhancers distaux, conduisant à la phosphorylation du CTD de l'ARN polymérase II et à l'activation de la transcription inductible par signal. Références associées : PMID:16109376, PMID:16109377, PMID:19596240
• Il recrute également P-TEFb sur RELA acétylé, liant BRD4 à l'activation de la voie NF-kappa-B. Références associées : PMID:19103749
• La phosphorylation sur des résidus comme S492 et S494 par CK2 facilite l'interaction de BRD4 avec les promoteurs ciblés par p53/TP53. Références associées : PMID:23317504
• Dans la réponse aux dommages à l'ADN, BRD4 agit comme un isolateur de chromatine en recrutant la condensine-2 sur les histones acétylées, limitant la propagation de la phosphorylation de H2A.X.
• BRD4 se localise dans le noyau et sur les chromosomes ; il est exprimé de manière ubiquitaire et subit un épissage alternatif et des modifications post-traductionnelles incluant la phosphorylation, l'acétylation et l'ubiquitination.
• De plus, BRD4 régule la différenciation des lymphocytes T CD4+ en cellules Th17 (par similarité).

Conseils expérimentaux et techniques

• Pour le Western blot, préparez les lysats avec des inhibiteurs de phosphatases pour préserver la phosphorylation et utilisez un gel SDS-PAGE à faible pourcentage (par exemple 6 à 8 %) pour une séparation optimale de la protéine BRD4 d'environ 152 kDa.
• Les tests dot blot et ELISA peuvent bénéficier d'un blocage avec une BSA non phosphorylée pour réduire le bruit de fond ; confirmez la spécificité par compétition avec un peptide non phosphorylé.
• La réactivité de l'anticorps sur des échantillons humains suggère son utilisation avec des lignées cellulaires humaines ; validez la réactivité croisée dans votre système d'étude si nécessaire.
• Envisagez l'utilisation de contrôles positifs appropriés, tels que des lysats de cellules traitées avec des inhibiteurs de phosphatases ou des inducteurs de phosphorylation connus.

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