pAb lapin Phospho-ATR-T1989 pour WB, IHC-P, ELISA - Q13535

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de la sérine/thréonine-protéine kinase ATR

• ATR est une sérine/thréonine-protéine kinase également connue sous le nom de protéine ataxia télangiectasie et Rad3-related ou protéine 1 liée à FRAP. Elle est codée par le gène ATR (FRP1) et existe sous au moins deux isoformes : l'isoforme 2 est présente dans le pancréas, le placenta et le foie, mais pas dans le cœur, les testicules et l'ovaire.
• Agit comme une kinase senseur clé des dommages à l'ADN, activant la signalisation des points de contrôle en réponse à des stress génotoxiques tels que les rayonnements ionisants, la lumière UV ou l'arrêt de la réplication de l'ADN (PubMed:10597277, PubMed:10608806, PubMed:10859164). Références associées : PMID:10597277 PMID:10608806 PMID:10859164
• Reconnaît la séquence consensus du substrat [ST]-Q et phosphoryle les cibles en aval, notamment BRCA1, CHEK1, MCM2, RAD17, RBBP8, RPA2, SMC1 et p53/TP53, inhibant ainsi la réplication de l'ADN et la mitose tout en favorisant la réparation, la recombinaison et l'apoptose (PubMed:11114888, PubMed:11418864, PubMed:11865061). Références associées : PMID:11114888 PMID:11418864 PMID:11865061
• Phosphoryle la 'Ser-139' de l'histone H2AX au niveau des sites de dommages à l'ADN, régulant la réponse aux dommages à l'ADN (PubMed:11673449) ; il est également nécessaire pour l'ubiquitination de FANCD2. Références associées : PMID:11673449
• Régule les transitions du cycle cellulaire en limitant l'activité de CDK1 pendant la phase S pour empêcher une entrée prématurée en G2, et est essentiel pour la stabilité des sites fragiles et la duplication correcte des centrosomes (PubMed:12526805, PubMed:30139873). Références associées : PMID:12526805 PMID:30139873
• Agit comme senseur de contrainte mécanique au niveau de l'enveloppe nucléaire, où il se relocalise après un stress et phosphoryle CHEK1 pour médier un point de contrôle (PubMed:25083873). Il favorise également la rupture de l'enveloppe nucléaire après des dommages à l'ADN en phosphorylant LMNA au niveau du 'Ser-282' (PubMed:37832547). Références associées : PMID:25083873 PMID:37832547
• Impliqué dans l'immunité innée : ATR se localise dans les micronoyaux issus de l'instabilité génomique et phosphoryle LMNA au niveau du 'Ser-395', entraînant la rupture de l'enveloppe micronucléaire et l'activation de la voie cGAS-STING (PubMed:37788673). Références associées : PMID:37788673
• La localisation subcellulaire est majoritairement nucléaire et associée aux chromosomes ; il est également présent au niveau de l'enveloppe nucléaire. Il est exprimé de manière ubiquitaire avec les niveaux les plus élevés dans les testicules. Il est classé dans les mots-clés suivants : phosphoprotéine, dommages à l'ADN, réparation de l'ADN, kinase et épissage alternatif.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène est un peptide phosphorylé synthétique autour du T1989, donc cet anticorps devrait reconnaître spécifiquement l'ATR phosphorylé à ce site. Pour la validation, envisagez d'utiliser un peptide non phosphorylé ou des lysats traités à la phosphatase comme témoins négatifs.
• En Western blot (WB), une bande d'environ 301 kDa est attendue. En raison du poids moléculaire élevé, optimisez les conditions de transfert (par exemple, faible concentration en méthanol, temps de transfert prolongés) et utilisez un témoin de chargement validé de taille similaire.
• Pour l'immunohistochimie (IHC-P) et l'ELISA, assurez-vous de réaliser des étapes appropriées de récupération d'antigène et de blocage ; la réactivité croisée avec la souris et le rat permet son utilisation dans des modèles de rongeurs, mais confirmez avec des contrôles tissulaires appropriés.
• Étant donné que la phosphorylation d'ATR est induite par les dommages à l'ADN, le traitement des cellules avec des agents génotoxiques (par exemple UV, hydroxyurée) peut améliorer la détection du signal.

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