pAb de lapin Phospho-ATR-S428 pour WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q13535

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation d'ATR

• Agit comme capteur des dommages à l'ADN, activant la signalisation du point de contrôle en réponse aux rayonnements ionisants, aux UV ou au stress de réplication. Références associées : PMID:10597277 PMID:10608806 PMID:10859164
• Phosphoryle les cibles en aval sur le motif consensus [ST]-Q, notamment BRCA1, CHEK1, MCM2, RAD17, RBBP8, RPA2, SMC1 et p53/TP53, ce qui entraîne l'inhibition de la réplication de l'ADN et de la mitose, et la promotion de la réparation de l'ADN, de la recombinaison et de l'apoptose. Références associées : PMID:11114888 PMID:11418864 PMID:11865061
• Phosphoryle l'histone H2AX au niveau du Ser-139 au niveau des foyers de dommages à l'ADN, un événement critique de la réponse aux dommages à l'ADN. Références associées : PMID:11673449
• Nécessaire pour l'ubiquitination de FANCD2 et essentiel au maintien de la stabilité des sites fragiles et à la régulation de la duplication des centrosomes. Références associées : PMID:15314022 PMID:12526805
• Régule la transition cellulaire S-G2 en limitant l'activité de CDK1 pendant la phase S pour empêcher une entrée prématurée en G2. Références associées : PMID:30139873
• Se relocalise vers l'enveloppe nucléaire en cas de stress mécanique et médie un point de contrôle via la phosphorylation de CHEK1 ; il favorise également la rupture de l'enveloppe nucléaire et de l'enveloppe micronucléaire par phosphorylation de LMNA, déclenchant la voie immunitaire innée cGAS-STING. Références associées : PMID:25083873 PMID:37788673 PMID:37832547
• Il est majoritairement localisé dans le noyau et sur les chromosomes, et est largement exprimé, avec des niveaux les plus élevés dans le testicule.

Conseils expérimentaux et techniques

• Étant donné que l'immunogène est un phosphopeptide autour du Ser428, l'anticorps doit reconnaître spécifiquement l'ATR phosphorylé sur ce site. Validez la phospho-spécificité en traitant les échantillons avec une phosphatase ou en utilisant une compétition avec le peptide non phosphorylé.
• Pour le western blot, notez le poids moléculaire élevé d'ATR (~301 kDa). Utilisez un gel à faible pourcentage (par exemple, un gradient 6 % ou 4-12 %) et un transfert humide prolongé (par exemple, toute la nuit à 4 °C) pour garantir un transfert efficace.
• ATR est une protéine peu abondante ; envisagez un enrichissement par immunoprécipitation ou l'utilisation d'un substrat de détection à haute sensibilité.
• Pour l'immunohistochimie et l'immunofluorescence, incluez des étapes de récupération antigénique appropriées et validez la coloration avec un contrôle négatif (par exemple, blocage par peptide ou couches traitées à la phosphatase).
• Incluez toujours des inhibiteurs de phosphatases dans les tampons de lyse pour préserver l'état de phosphorylation pendant la préparation des échantillons.
• En tant qu'anticorps polyclonal de lapin, une variabilité entre lots peut survenir ; nous recommandons de re-valider l'anticorps dans votre contexte expérimental spécifique.

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