AcP monoclonale de lapin Phospho-AKT1-T450 + AKT2-T451 + AKT3-T447 pour WB, IHC-P, ELISA - P31749 / P31751 / Q9Y243

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de la famille AKT

• La famille AKT comprend trois sérine/thréonine-protéine kinases très proches : AKT1 (PKB alpha, P31749), AKT2 (PKB beta, P31751) et AKT3 (PKB gamma, Q9Y243), codées respectivement par les gènes AKT1, AKT2 et AKT3. Elles partagent une forte homologie de séquence et des rôles biologiques chevauchants mais distincts.
• Les kinases AKT régulent divers processus cellulaires, notamment le métabolisme, la prolifération, la survie cellulaire, la croissance et l'angiogenèse, en phosphorylant un large éventail de substrats en aval (plus de 100 répertoriés).
  Références associées : PMID:11882383, PMID:15526160, PMID:15861136
• Après activation par les facteurs de croissance et la signalisation PI3K, AKT médie l'absorption de glucose induite par l'insuline via la translocation SLC2A4/GLUT4, favorise la synthèse de glycogène en inhibant GSK3 et stimule la synthèse protéique par activation de la voie mTORC1.
  Références associées : PMID:11994271, PMID:12150915, PMID:12172553
• AKT favorise la survie cellulaire en phosphorylant et inactivant les facteurs pro-apoptotiques tels que MAP3K5/ASK1 et BAD, et en activant des facteurs de transcription comme CREB1 qui induisent l'expression de gènes anti-apoptotiques.
  Références associées : PMID:11154276, PMID:9829964, PMID:10926925
• La localisation sous-cellulaire comprend le cytoplasme, le noyau, la membrane cellulaire et l'espace intermembranaire mitochondrial, ce qui témoigne de ses larges rôles de signalisation dans les réponses cellulaires compartimentées.
• Les modifications post-traductionnelles, en particulier la phosphorylation, sont essentielles à l'activité d'AKT ; deux résidus clés (Thr-308 et Ser-473 dans AKT1) sont indispensables à une activation complète, tandis que la phosphorylation au niveau du motif de rotation (Thr-450 dans AKT1, équivalent à Thr-451 dans AKT2 et Thr-447 dans AKT3) peut influencer la stabilité de la kinase et les interactions protéiques.
• AKT1 est exprimé de façon ubiquitaire, et son expression et sa phosphorylation altérées sont associées à des pathologies dont le cancer ; des niveaux élevés d'AKT phosphorylé sont souvent observés dans les cancers du sein et de la prostate.
• Les mots-clés associés à AKT1 (UniProt P31749) sont : apoptose, métabolisme glucidique, membrane cellulaire, cytoplasme, kinase, noyau, phosphoprotéine, proto-oncogène, sérine/thréonine-protéine kinase, régulation de la traduction.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène est un peptide phosphorylé synthétique couvrant la région Thr-450 de l'AKT1 humain ; l'anticorps est censé reconnaître AKT1, AKT2 et AKT3 lorsqu'ils sont phosphorylés au niveau des sites équivalents respectifs (T450/T451/T447).
• Pour le Western blot, préparez les lysats avec des inhibiteurs de phosphatases pour préserver la phosphorylation ; les bandes attendues se situent autour de 48 à 55 kDa selon l'isoforme. Incluez des contrôles positifs appropriés (par exemple des cellules stimulées par un facteur de croissance) et des contrôles négatifs (échantillons non traités ou traités par phosphatase).
• Envisagez d'utiliser des échantillons traités par phosphatase ou un contrôle de blocage par peptide non phosphorylé pour confirmer la phospho-spécificité du signal.
• En immunohistochimie (IHC-P), optimisez les conditions de récupération d'antigène et incluez des contrôles tissulaires positifs/négatifs pour valider la coloration ; les signaux phospho-spécifiques peuvent être sensibles à la fixation et au traitement.
• Pour ELISA, associez l'anticorps à des réactifs de capture/détection appropriés et validez le test en utilisant des concentrations connues de peptide phosphorylé ou de lysats cellulaires.

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