Phospho-AKT1-T308+AKT2-T309+AKT3-T305 Lapin pAb - P31749 / P31751 / Q9Y243

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation d'AKT1 (RAC-alpha sérine/thréonine-protéine kinase)

• AKT1 (PKBα, RAC-PK-alpha) est une sérine/thréonine kinase exprimée de manière ubiquitaire qui, avec AKT2 et AKT3, forme la famille des kinases AKT centrale à la signalisation PI3K, régulant le métabolisme, la prolifération, la survie, la croissance et l'angiogenèse. Références associées : PMID:11882383 PMID:15526160 PMID:15861136
• Par la phosphorylation de nombreux substrats, AKT1 médie la capture du glucose induite par l'insuline (TBC1D4) et la synthèse du glycogène (GSK3A/GSK3B). Références associées : PMID:11994271
• Il favorise la survie cellulaire en phosphorylant MAP3K5/ASK1 à Ser-83, inhibant l'apoptose, et active la signalisation mTORC1 via la phosphorylation de TSC2 et DEPDC5. Références associées : PMID:11154276 PMID:12150915 PMID:12172553 PMID:31548394 PMID:33594058
• AKT1 régule les facteurs de transcription FOXO1/3/4 et CREB1, influençant l'expression des gènes pro-survie et la transcription dépendante de NF-κB. Références associées : PMID:10358075 PMID:9829964
• Au niveau subcellulaire, AKT1 circule entre le cytoplasme, le noyau, la membrane cellulaire et les mitochondries, où il module la capture du calcium mitochondrial et d'autres fonctions spécifiques aux organites.
• Les phosphorylations activatrices clés se produisent au niveau de Thr-308 (ou l'équivalent Thr-309 dans AKT2, Thr-305 dans AKT3) dans la boucle d'activation et de Ser-473 dans le motif hydrophobe, déclenchées par la stimulation par les facteurs de croissance.
• AKT1 est fréquemment dérégulé dans les cancers (prostate, sein) et agit comme un proto-oncogène, les niveaux élevés de phosphorylation étant corrélés à la progression de la maladie.

Guide expérimental et conseils techniques

• Utilisez des inhibiteurs de phosphatases lors de la préparation des échantillons pour préserver le signal de phosphorylation ; validez la spécificité phospho en comparant avec des anticorps anti-AKT totaux ou par un traitement à la phosphatase.
• L'immunogène est un phosphopeptide synthétique autour de Thr-308 de l'AKT1 humain ; l'anticorps est censé détecter l'AKT1, l'AKT2 et l'AKT3 phosphorylés au niveau des sites équivalents lorsqu'il est testé sur les espèces appropriées.
• Pour le Western blot, attendez-vous à plusieurs bandes correspondant aux différents isoformes d'AKT (~48-55 kDa) ; confirmez l'identité des bandes avec des contrôles spécifiques d'isoforme ou un siRNA si nécessaire.
• Pour l'ELISA, envisagez une configuration d'anticorps appariés phospho-spécifique/AKT total pour normaliser la quantité de protéine chargée.
• Optimisez la dilution de l'anticorps primaire pour votre type d'échantillon spécifique ; les dilutions de départ suggérées pour le WB sont généralement de 1:500 à 1:2000, mais doivent être déterminées empiriquement.

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