Anticorps monoclonal de lapin anti-Phospho-AKT1-S124 pour WB et ELISA - P31749

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'AKT1

• L'AKT1 est une sérine/thréonine-protéine kinase appartenant à la famille AKT (AKT1, AKT2, AKT3) qui régule des processus clés incluant le métabolisme, la prolifération, la survie cellulaire, la croissance et l'angiogenèse (PubMed:11882383, PubMed:15526160, PubMed:15861136). Références associées : PMID:11882383 PMID:15526160 PMID:15861136
• Il transmet le signal en aval de la PI3K pour médier les effets de l'insuline et des facteurs de croissance, favorisant la capture du glucose (SLC2A4/GLUT4), la synthèse du glycogène (via l'inhibition de GSK3) et la synthèse des protéines (via l'activation de mTORC1) (PubMed:11994271, PubMed:12150915, PubMed:12172553). Références associées : PMID:11994271 PMID:12150915 PMID:12172553
• L'AKT1 régule la survie cellulaire en phosphorylant et en inhibant les facteurs pro-apoptotiques : il diminue l'activité de MAP3K5/ASK1 (PubMed:11154276), stimule BAD (PubMed:10926925) et active la transcription NF-kappa-B de BCL2/MCL1 (PubMed:9829964). Références associées : PMID:11154276 PMID:10926925 PMID:9829964
• La phosphorylation des facteurs de transcription FOXO (FOXO1, FOXO3, FOXO4) par l'AKT1 conduit à la liaison de 14-3-3 et à la rétention cytoplasmique, inhibant ainsi la transcription des gènes d'arrêt du cycle cellulaire et pro-apoptotiques (PubMed:10358075). Références associées : PMID:10358075
• Localisé dans le cytoplasme, le noyau, la membrane cellulaire et l'espace intermembranaire mitochondrial, l'AKT1 se transloque dynamiquement en réponse aux stimuli ; dans les mitochondries, il module la capture du calcium et l'activité du canal TMEM175, indépendamment de sa fonction kinase (PubMed:32228865, PubMed:30504268).
• Exprimé de manière ubiquitaire dans les tissus humains, l'AKT1 est fréquemment hyperactivé dans les cancers ; des niveaux élevés de phospho-Tyr176 AKT1 sont corrélés à la progression du cancer du sein des stades normaux aux stades métastatiques.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Pour garantir la spécificité phospho, comparez les signaux de lysats traités avec et sans phosphatase lambda, ou effectuez des tests de compétition par peptide avec le peptide immunogène et sa contrepartie non phosphorylée.
• Pour le Western blot, les lysats doivent être préparés avec des inhibiteurs de phosphatases ; le poids moléculaire attendu est d'environ 56 kDa ; un contrôle de charge tel que l'AKT1 total ou la GAPDH est recommandé.
• Dans les applications ELISA, utilisez le peptide phospho-synthétique comme standard pour générer une courbe d'étalonnage pour l'analyse semi-quantitative de l'AKT1-S124 phosphorylé dans les échantillons biologiques.
• L'activation de la phosphorylation de l'AKT1 peut être vérifiée dans des lignées cellulaires stimulées par l'insuline ou des facteurs de croissance ; envisagez d'utiliser des inhibiteurs de la PI3K (par exemple, LY294002) pour confirmer la dépendance à la voie.

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