Anticorps monoclonal de lapin anti-CD8a Humain/Singe conjugué PE/Cyanine7 pour la cytométrie en flux - P01732

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de CD8a

• Le gène CD8A code pour la chaîne alpha de la glycoprotéine de surface des lymphocytes T CD8, un corécepteur critique dans l'immunité adaptative. Il existe sous forme d'hétérodimère alpha/bêta lié par des ponts disulfure ou d'homodimère alpha/alpha.
• La chaîne alpha de CD8 fonctionne comme un corécepteur pour les molécules du CMH de classe I, interagissant simultanément avec le récepteur des cellules T (TCR) et le CMH I sur les cellules présentatrices d'antigènes. Cela recrute la kinase Src LCK, déclenchant des voies de signalisation en aval qui conduisent à l'activation des lymphocytes T cytotoxiques, à la production de cytokines et à la lyse des cellules cibles.
• Dans les cellules tueuses naturelles (NK), les homodimères de CD8A fournissent un mécanisme de survie et facilitent la conjugaison et la lyse de multiples cellules cibles. Ils favorisent également la survie et la différenciation des lymphocytes activés en lymphocytes T CD8 mémoire.
• La localisation subcellulaire est principalement à la membrane cellulaire en tant que protéine membranaire de type I à passage unique. Une forme soluble sécrétée est également produite par épissage alternatif.
• Spécificité tissulaire : Dans les lymphocytes T dérivés du thymus, le CD8 est typiquement constitué d'un hétérodimère alpha/bêta. Les homodimères de CD8A se trouvent sur des sous-populations de cellules NK, de lymphocytes T mémoire, de lymphocytes intra-épithéliaux, de monocytes et de cellules dendritiques. L'expression est régulée à la hausse sur les cellules dendritiques plasmacytoïdes après stimulation virale.
• Les modifications post-traductionnelles comprennent la glycosylation, qui explique le poids moléculaire observé supérieur à celui prédit (non modifié ~26 kDa ; formes matures à 21, 25 et 30 kDa), et la palmitoylation, qui ancre la protéine aux radeaux lipidiques.

Guide expérimental et conseils techniques

• L'immunogène utilisé pour générer cet anticorps est une protéine recombinante correspondant aux acides aminés 22-182, qui englobe le domaine extracellulaire de CD8A. Cette région est cruciale pour l'interaction avec le CMH I et est exposée à la surface cellulaire, ce qui en fait une cible idéale pour les applications de cytométrie en flux.
• Pour la cytométrie en flux (FC), effectuez un titrage de l'anticorps pour déterminer la concentration optimale pour votre échantillon spécifique. Incluez des anticorps de contrôle isotypique appropriés conjugués au même fluorophore (PE/Cyanine7) pour évaluer la liaison non spécifique.
• Étant donné que le PE/Cyanine7 est un colorant tandem, évitez une exposition prolongée à la lumière et aux fixateurs qui pourraient dégrader le colorant. Envisagez d'utiliser un contrôle de compensation lors de l'exécution de panels multicolores pour corriger le chevauchement spectral.
• Validez les performances de l'anticorps en utilisant des populations cellulaires positives et négatives connues : par exemple, les lymphocytes T du sang périphérique humain (positifs CD8+) versus les lymphocytes B (négatifs) ou des lignées cellulaires appropriées.
• Pour détecter le CD8A intracellulaire (par exemple, dans les lymphocytes T activés ou résidents dans les tissus), optimisez les conditions de fixation et de perméabilisation qui préservent l'épitope et le fluorophore.

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