Anticorps monoclonal Lapin anti-Humain TNF-α conjugué PE/Cyanine7 pour FC (intra) - P01375

Spécifications et paramètres clés du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation du TNF

• Le TNF-α (cachectine, TNF-alpha, TNFSF2) est une cytokine pro-inflammatoire pléiotrope appartenant à la superfamille des ligands du facteur de nécrose tumorale, existant sous forme de protéine transmembranaire de type II et d'homotrimère soluble après clivage protéolytique.
• Il est principalement sécrété par les macrophages activés et se lie à ses récepteurs TNFRSF1A/TNFR1 et TNFRSF1B/TNFBR, déclenchant des voies de signalisation qui peuvent conduire à la mort cellulaire, à la survie, à la différenciation ou à la prolifération selon le contexte cellulaire.
• Le TNF-α agit comme une pyrogène endogène, induisant de la fièvre directement ou via une stimulation de l'IL-1, et est un médiateur clé de la cachexie dans l'inflammation chronique et le cancer.
• Dans les cellules T régulatrices (Tregs), le TNF-α altère la fonction suppressive en régulant à la hausse la phosphatase protéique 1 (PP1), qui déphosphoryle FOXP3 sur la Ser-418, désactivant ainsi FOXP3 et compromettant l'activité des Tregs dans la polyarthrite rhumatoïde. Références connexes : PMID:23396208
• Le TNF-α peut médier une activité anticancéreuse : dans les cellules du cancer de la vessie, les neutrophiles stimulés par le BCG tuent les cellules tumorales via un mécanisme dépendant du TNF-α qui synergise avec les mimétiques SMAC. Références connexes : PMID:16829952 PMID:22517918 PMID:23396208
• Il favorise l'angiogenèse en induisant synergiquement la production de VEGF avec l'IL-1β et l'IL-6, et stimule l'ostéoclastogenèse, contribuant ainsi à la résorption osseuse. Références connexes : PMID:12794819
• Le domaine intracellulaire (ICD) du TNF-α peut être généré par un protéolyse intramembranaire régulé et s'est avéré induire la production d'IL-12 dans les cellules dendritiques.
• Le TNF-α est localisé à la membrane cellulaire et est également sécrété ; les modifications post-traductionnelles comprennent la glycosylation, la phosphorylation, la myristoylation et la formation de ponts disulfures, qui modulent sa stabilité et sa fonction.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène (aa 77-233) correspond au domaine extracellulaire soluble du TNF-α humain ; cet anticorps est censé reconnaître à la fois le précurseur transmembranaire et la cytokine mature sécrétée.
• Pour la cytométrie en flux intracellulaire (FC intra), optimisez les conditions de fixation et de perméabilisation cellulaires. Utilisez des cellules non stimulées ou des stimulations non pertinentes comme témoins négatifs.
• Effectuez un titrage de l'anticorps pour déterminer la concentration de marquage optimale pour votre système expérimental et votre type cellulaire spécifiques.
• Puisque la réactivité croisée est limitée à l'humain, validez la spécificité sur des échantillons humains et envisagez d'utiliser des témoins biologiques appariés par espèce.

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