Anticorps Monoclonal de Rat anti-Souris CD45R/B220 Conjugué à la PE pour Cytométrie en Flux - P06800 / P08575

Spécifications et Paramètres Principaux du Produit

Contexte Biologique : Fonction et Localisation du CD45R/B220

• Le CD45R/B220, codé par le gène Ptprc, est une phosphatase protéique tyrosine de type récepteur (PTPase) également connue sous le nom d'Antigène Commun des Leucocytes (L-CA) et d'Antigène Lymphocytaire 5 (Ly-5). Il est principalement exprimé sur les cellules hématopoïétiques, y compris les lymphocytes B et T, et existe sous plusieurs isoformes générées par épissage alternatif.
• La protéine sert de régulateur critique de la signalisation du récepteur des cellules T en modulant l'activité des kinases de la famille Src telles que LYN et FYN. Elle déphosphoryle LYN, influençant les cascades de signalisation en aval essentielles pour l'activation et la coactivation des cellules T lors de la liaison à DPP4.
• Au niveau des synapses immunologiques entre cellules présentatrices d'antigène (CPA) et cellules T, le CD45 interagit avec la CLEC10A sur les cellules dendritiques immatures, qui reconnaît le CD45 portant l'antigène Tn sur les cellules T effectrices. Cette interaction aide à affiner les seuils d'activation des cellules T et à limiter les réponses autoréactives (Par similarité).
• Le CD45 contient deux domaines phosphatases intracellulaires : le premier domaine présente une activité catalytique, tandis que le second semble réguler la spécificité du substrat. La région extracellulaire est fortement glycosylée et contribue aux interactions avec les ligands et aux fonctions spécifiques des isoformes.
• La protéine se localise principalement à la membrane plasmique et est enrichie dans les radeaux membranaires et les synapses immunologiques, où elle organise spatialement les complexes de signalisation suite à l'engagement de l'antigène.
• En tant que glycoprotéine transmembranaire et membre de la famille des phosphatases protéiques, le CD45 est un marqueur bien établi des lignées cellulaires immunitaires. L'isoforme B220 est spécifiquement associée aux cellules B et est largement utilisée pour identifier les populations de cellules B dans les modèles murins.
• Les modifications post-traductionnelles, notamment la phosphorylation et la glycosylation, modulent l'activité enzymatique du CD45 et son expression à la surface cellulaire, influençant ainsi la dynamique de la signalisation des cellules immunitaires.
• Bien qu'il soit principalement étudié dans les cellules lymphoïdes, le CD45 joue également des rôles dans d'autres sous-ensembles de leucocytes, contribuant aux réponses immunitaires innées et adaptatives intégrées.

Conseils Expérimentaux et Astuces Techniques

• L'immunogène est un peptide synthétique dérivé d'une région conservée du CD45R/B220 souris/humain. L'anticorps résultant est censé reconnaître le CD45R/B220 de souris ; la réactivité croisée avec les orthologues humains doit être validée expérimentalement si nécessaire.
• Cet anticorps est conjugué à la PE (phycoérythrine), un fluorophore brillant adapté aux panneaux de cytométrie en flux multicolores. Envisagez de titrer l'anticorps pour optimiser le rapport signal/bruit et minimiser la liaison non spécifique dans votre système cellulaire spécifique.
• Pour les applications de cytométrie en flux, utilisez des colorants de viabilité appropriés et des réactifs de blocage des récepteurs Fc pour réduire le coloration de fond. Analysez des tissus lymphoïdes de souris frais ou correctement cryoconservés (rate, ganglions lymphatiques) pour détecter les populations de cellules B positives pour le B220.
• Compte tenu de la plage de poids moléculaire rapportée (130–144 kDa) reflétant l'épissage alternatif et la glycosylation, confirmez l'expression et la taille de la bande par western blotting si vous adaptez ce produit pour des méthodes de détection orthogonales, bien que l'application validée principale soit la cytométrie en flux.

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