Anticorps monoclonal de lapin anti-IFN-gamma de rat conjugué à la PE pour la cytométrie en flux intracellulaire - P01581

Spécifications et paramètres essentiels du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de l’IFN-gamma

• L’interféron gamma (IFN-gamma) est une cytokine interféron de type II principalement produite par les lymphocytes T activés et les cellules tueuses naturelles (NK), agissant comme médiateur central de l’immunité innée et adaptative.
• Il exerce des activités antimicrobiennes, antivirales et antitumorales en activant les cellules immunitaires effectrices et en renforçant la présentation antigénique par l’intermédiaire des voies du CMH de classe I et II.
• Il transmet des signaux par la voie JAK-STAT : lors de sa liaison à son récepteur IFNGR1, il induit l’activation de JAK2, JAK1 et STAT1, entraînant la translocation nucléaire de STAT1 et la transcription de gènes régulés par les interférons tels que IRF1.
• Il augmente le traitement des antigènes du CMH de classe I en induisant le remplacement des sous-unités constitutives du protéasome par des sous-unités de l’immunoprotéasome et en induisant l’activateur PA28, améliorant ainsi la génération des peptides et le répertoire disponible pour le chargement du CMH.
• Il favorise l’expression du CMH de classe II en augmentant la régulation de molécules clés telles que les cathepsines B, H et L (par similarité).
• Il participe à la régulation des cellules souches hématopoïétiques, influençant leur développement, leur quiescence et leur différenciation (par similarité).
• La protéine est sécrétée et présente des caractéristiques structurales particulières, notamment un peptide signal, des sites de glycosylation et une modification par l’acide pyrrolidone-carboxylique.
• La protéine mature d’IFN-gamma de rat possède un poids moléculaire prédit d’environ 18 kDa (17 918 Da), ce qui est cohérent avec la conception de l’immunogène.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L’anticorps est conçu pour la cytométrie en flux intracellulaire (FC intra). Veillez à utiliser des protocoles appropriés de fixation et de perméabilisation afin de préserver la fluorescence de la PE et l’accessibilité de l’antigène.
• Étant donné que l’immunogène couvre la région du peptide mature (aa 20-156), l’anticorps reconnaît probablement la forme sécrétée et maturée de l’IFN-gamma de rat.
• Réalisez des expériences de titration afin de déterminer la concentration de travail optimale pour votre type cellulaire et vos conditions de stimulation spécifiques.
• Validez les performances de l’anticorps à l’aide de contrôles positifs appropriés, tels que des splénocytes de rat stimulés par la PMA/ionomycine ou des lignées de lymphocytes T activés, et incluez des contrôles d’isotype.
• Protégez les échantillons conjugués à la PE de la lumière afin d’éviter la photodécoloration, et utilisez des réglages de compensation appropriés en cas d’association avec d’autres fluorophores.

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