Anticorps monoclonal de lapin anti-Humain/Souris Phospho-Zap70-Y319+Syk-Y352 conjugué à la PE pour cytométrie en flux intracellulaire - P43403

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de ZAP70

• ZAP70 est une tyrosine kinase de 70 kDa essentielle pour l'immunité adaptative, jouant un rôle central dans la signalisation du récepteur des cellules T (TCR) en phosphorylant les protéines adaptatrices LAT et LCP2 lors de l'activation.
• Suite à l'engagement du TCR, ZAP70 est recrutée vers les motifs ITAM phosphorylés de CD3E et CD247/CD3Z à la membrane plasmique, un processus qui soulage son auto-inhibition et nécessite une phosphorylation médiée par LCK (PubMed:7509083).
  Références connexes : PMID:7509083
• ZAP70 régule davantage la dynamique de l'activation des cellules T en contrôlant la réorganisation du cytosquelette, l'adhésion et la mobilité, assurant une livraison appropriée des effecteurs aux cellules présentatrices d'antigène.
• Elle est également impliquée dans la régulation négative du TCR en médiant l'internalisation et la dégradation de CD247/CD3Z par interaction avec la ligase d'ubiquitine CBL et les adaptateurs SLA/SLA2, modulant ainsi l'arrêt du signal.
• ZAP70 est exprimée dans les cellules T, les cellules natural killer, les thymocytes précoces et les cellules B pro/pré, et contribue au développement et à l'activation des cellules T et B.
• La protéine contient deux domaines SH2 qui se lient spécifiquement aux ITAM phosphorylés, un domaine kinase de liaison à l'ATP, et subit des modifications post-traductionnelles incluant la phosphorylation, l'acétylation et l'ubiquitination, comme souligné par les mots-clés UniProt tels que « Phosphoprotéine », « Conjugaison Ubl », « Liaison isopeptidique » et « Acétylation ».
• L'épissage alternatif produit plusieurs isoformes de ZAP70, et les variantes associées à des maladies sont liées à une immunodéficience combinée sévère (SCID) due à une signalisation TCR altérée.
• Le site de l'immunogène (Y319) est un site clé de phosphorylation régulatrice dans la région interdomaine B, hautement conservé chez l'humain et la souris, et sa phosphorylation est critique pour l'activation de ZAP70 ; l'anticorps peut également réagir de manière croisée avec Syk au niveau de son Y352 analogue en raison de l'homologie de séquence dans la boucle d'activation.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• En raison de la nature spécifique au phosphate de cet anticorps, incluez des inhibiteurs de phosphatases dans tous les tampons de lyse, de fixation et de coloration pour maintenir les niveaux de phosphorylation lors du traitement des échantillons.
• Validez la spécificité de l'anticorps en comparant les signaux dans les cellules stimulées par rapport aux cellules non stimulées, ou en traitant les échantillons avec la phosphatase lambda avant la coloration.
• L'anticorps est validé pour la cytométrie en flux intracellulaire (FC intra) ; assurez-vous d'utiliser des protocoles de fixation et de perméabilisation optimisés (par exemple, en utilisant du méthanol ou une perméabilisation à base de saponine) pour obtenir les meilleurs résultats.
• Pour les études sur la signalisation des cellules T, envisagez d'utiliser des témoins positifs connus tels que des cellules Jurkat stimulées par anti-CD3/CD28 ou des PBMC humains primaires, et des témoins négatifs comme les cellules T au repos ou les cellules B déficientes en Syk si vous évaluez la réactivité croisée.

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