Anticorps monoclonal de lapin anti-Siglec-8 humain conjugué à la PE pour FC - Q9NYZ4

Spécifications et paramètres essentiels du produit

Contexte biologique : fonction et localisation du Siglec-8

• Le Siglec-8, également appelé SAF-2 (membre 2 de la famille des sialoadhésines), est une glycoprotéine membranaire de type I à passage unique appartenant à la superfamille des immunoglobulines. L’épissage alternatif génère plusieurs isoformes.
• Le Siglec-8 assure une adhésion dépendante de l’acide sialique aux cellules sanguines, en se liant préférentiellement à l’acide sialique lié en α-2,3, avec une certaine affinité pour les liaisons α-2,6 ; les interactions en cis à la surface de la même cellule peuvent masquer le site de liaison au ligand. Références associées : PMID:10625619, PMID:10856141
• Il reconnaît spécifiquement l’acide N-acétylneuraminique terminal (acide sialique) ainsi que le galactose 6-O-sulfaté sous-jacent, avec une forte préférence pour les épitopes glycanes de type sialyl-Lewis X contenant du Gal-6-sulfaté. Références associées : PMID:27357658
• La protéine est principalement exprimée à la surface des éosinophiles, des basophiles et des mastocytes, ce qui en fait un marqueur spécifique de ces types cellulaires dans les études hématopoïétiques.
• La localisation subcellulaire se situe principalement au niveau de la membrane plasmique, ce qui est cohérent avec son rôle dans les interactions cellule-cellule et la signalisation.
• Le Siglec-8 contient des domaines de type immunoglobuline et des ponts disulfure, caractéristiques des molécules d’adhésion, et est modifié post-traductionnellement par glycosylation.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L’immunogène correspond au domaine extracellulaire (acides aminés 17 à 363), ce qui suggère que l’anticorps reconnaît probablement des épitopes exposés à la surface, le rendant adapté à la cytométrie en flux sur des cellules vivantes non perméabilisées.
• Pour les applications de cytométrie en flux, effectuer une titration de l’anticorps conjugué à la PE afin de déterminer la concentration de marquage optimale à l’aide de lignées cellulaires pertinentes ou de cellules primaires connues pour exprimer le Siglec-8 (par exemple, des populations d’éosinophiles, de basophiles ou de mastocytes).
• Inclure des contrôles isotopiques appropriés ainsi que des étapes de blocage des récepteurs Fc afin de minimiser la liaison non spécifique.
• Valider la spécificité du marquage dans le système d’échantillon prévu, en tenant compte de l’expression rapportée du Siglec-8 sur les basophiles, les éosinophiles et les mastocytes humains.
• Noter qu’il existe plusieurs isoformes protéiques (44, 46 et 54 kDa), mais que le conjugué à la PE est conçu pour la détection à la surface cellulaire et ne permet pas de distinguer les variantes de poids moléculaire.

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