Anticorps monoclonal PE lapin anti-RANKL/CD254 humain pour cytométrie en flux (intracellulaire) - O14788

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de RANKL/CD254

• TNFSF11, également appelé RANKL, OPGL, ODF, TRANCE et CD254, est un membre de la superfamille des ligands du facteur de nécrose tumorale (TNF) (UniProt : O14788).
• Il agit comme une cytokine clé en se liant à TNFRSF11A/RANK et TNFRSF11B/OPG, et fonctionne comme facteur de différenciation et d'activation des ostéoclastes. Références associées : PMID:22664871
• Dans le système immunitaire, RANKL améliore la stimulation médiée par les cellules dendritiques de la prolifération des lymphocytes T naïfs et régule les interactions entre lymphocytes T et cellules dendritiques (Par similarité).
• Il induit l'ostéoclastogenèse par activation de voies de signalisation conduisant à la translocation nucléaire de NFATC1 et à la transcription de gènes spécifiques des ostéoclastes ; il induit également l'activation de CREB1 et la production de ROS mitochondriaux via l'axe TMEM64-ATP2A2 (Par similarité).
• Au niveau sous-cellulaire, RANKL existe sous forme de protéine transmembranaire sur la membrane cellulaire, mais peut également être clivé et sécrété ; on le détecte sous forme cytoplasmique et sécrétée.
• L'expression la plus élevée est observée dans les ganglions lymphatiques périphériques, avec une expression plus faible dans la rate, les leucocytes sanguins périphériques, la moelle osseuse, le cœur, le placenta, le muscle squelettique, l'estomac et la thyroïde.
• Les modifications post-traductionnelles incluent la glycosylation, et l'épissage alternatif produit plusieurs isoformes, contribuant à sa diversité fonctionnelle ; des mutations de TNFSF11 sont associées à l'ostéopétrose.
• Mots-clés : cytokine, membrane, épissage alternatif, protéine développementale, glycoprotéine, ancre de signalisation, hélice transmembranaire.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène couvre le domaine extracellulaire (aa 136-317), il peut donc reconnaître à la fois RANKL lié à la membrane et RANKL soluble. Pour la cytométrie en flux intracellulaire, assurez une perméabilisation cellulaire adéquate et envisagez d'inclure des contrôles non stimulés.
• En tant qu'anticorps conjugué au PE, protégez-le de la lumière et évitez les cycles répétés de congélation-décongélation pour préserver l'intensité de fluorescence et l'intégrité de l'anticorps.
• Validez les performances dans des modèles cellulaires adaptés tels que les lymphocytes T activés, les précurseurs d'ostéoclastes ou les lignées cellulaires exprimant RANKL. Réalisez un titrage de l'anticorps pour déterminer la concentration de coloration optimale pour votre système spécifique.
• En cas d'utilisation en combinaison avec d'autres fluorophores, concevez soigneusement les contrôles de compensation pour éviter les artefacts liés au chevauchement spectral.

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