Anticorps monoclonal anti-humain NT5E/CD73 conjugué PE de lapin pour la cytométrie en flux - P21589

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de NT5E/CD73

• NT5E/CD73, également connu sous le nom d'ecto-5'-nucléotidase, est une protéine de membrane cellulaire ancrée par glycosylphosphatidylinositol (GPI) qui catalyse l'hydrolyse des monophosphates de nucléotides extracellulaires en leurs nucléosides correspondants et en phosphate inorganique.
• L'enzyme présente une préférence pour l'AMP comme substrat, mais peut également hydrolyser l'IMP, l'UMP, le GMP, le CMP et les monophosphates de désoxyribonucléotides tels que le dAMP, le dCMP et le dTMP. Références associées : PMID:21933152, PMID:22997138, PMID:23142347
• NT5E montre une sélectivité pour les monophosphates de ribonucléotides par rapport aux formes désoxyribose. Références associées : PMID:34403084
• La protéine est localisée sur la membrane cellulaire où elle régule la signalisation purinergique en convertissant l'AMP extracellulaire en adénosine, un métabolite immunosuppresseur puissant.
• NT5E est un membre de la famille des 5'-nucléotidases et nécessite des ions zinc pour son activité hydrolytique, comme l'indiquent les domaines de liaison aux métaux.
• L'épissage alternatif du gène NT5E produit plusieurs variants de transcrits, bien que la signification fonctionnelle de tous les isoformes ne soit pas entièrement caractérisée.
• Les modifications post-traductionnelles comprennent la glycosylation liée à N, la formation de ponts disulfure et l'ajout d'une ancre GPI qui ancre l'enzyme à la surface cellulaire.

Guide expérimental et conseils techniques

• Cet anticorps monoclonal conjugué au PE est conçu pour la détection directe par cytométrie en flux du CD73 à la surface de cellules humaines vivantes. Assurez-vous que les cellules sont viables pour préserver l'intégrité membranaire et une présentation optimale de l'épitope.
• L'immunogène correspond au domaine extracellulaire (a.a. 27-547), donc l'anticorps est censé reconnaître un épitope accessible à la surface cellulaire sans nécessiter de perméabilisation.
• Pour de meilleurs résultats, titrez l'anticorps pour déterminer la concentration optimale pour votre type cellulaire spécifique et vos conditions de marquage. Typiquement, 0,1–1 µg pour 1×10^6 cellules est une plage de départ raisonnable.
• Incluez des contrôles isotypiques appropriés et des contrôles de compensation lors de la réalisation de cytométrie en flux multicolore pour tenir compte de la liaison non spécifique et du chevauchement spectral.
• L'expression de CD73 peut être modulée par l'activation cellulaire ; envisagez de valider l'anticorps dans des échantillons au repos et stimulés, si cela est pertinent pour votre étude.

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