Anticorps monoclonal de lapin anti-CD117/c-Kit humain conjugué à la PE pour cytométrie en flux - P10721

Spécifications et paramètres essentiels du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de CD117/c-Kit

• CD117, également appelé c-Kit, SCFR ou PBT, est un récepteur transmembranaire à activité tyrosine-protéine kinase codé par le gène KIT ; l’épissage alternatif produit plusieurs isoformes (UniProt : P10721).
• Le ligand principal est le facteur des cellules souches (SCF/KITLG). La liaison du ligand induit la dimérisation et l’autophosphorylation du récepteur, activant des cascades de signalisation en aval qui régulent la survie, la prolifération et la différenciation cellulaires dans l’hématopoïèse, la mélanogenèse, la gamétogenèse et le développement des mastocytes.
• Le CD117 activé recrute et phosphoryle des protéines adaptatrices et des enzymes clés, notamment PIK3R1 (PI3K), GRB2 et PLCG1, entraînant l’activation des voies AKT, RAS/MAPK et STAT (STAT1, STAT3, STAT5), ainsi que la production des seconds messagers DAG et IP3.
• Le CD117 est principalement localisé sur la membrane cellulaire, mais peut également être présent dans le cytoplasme après internalisation et transport intracellulaire.
• Dans les testicules, le CD117 est détecté dans les spermatogonies de la couche basale et dans les cellules interstitielles de Leydig, et son expression est maintenue dans les spermatozoïdes éjaculés (au niveau protéique). Références associées : PMID:20601678
• La protéine est fortement glycosylée, contient des domaines extracellulaires de type immunoglobuline et un domaine kinase intracellulaire, et est classée comme proto-oncogène ; les ponts disulfure et la phosphorylation constituent des caractéristiques structurelles et fonctionnelles essentielles.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• Cet anticorps est directement conjugué à la PE, ce qui le rend adapté à la détection du CD117 par cytométrie en flux en une seule étape, sans nécessiter d’anticorps secondaire.
• L’immunogène correspond à la région extracellulaire (aa 26–520) du CD117 humain, ce qui suggère une réactivité avec le récepteur de surface natif.
• Pour la cytométrie en flux, effectuez une titration de l’anticorps afin de déterminer la concentration optimale pour votre type cellulaire et votre instrument spécifiques ; incluez des contrôles isotopiques appropriés ainsi que des étapes de blocage des récepteurs Fc afin de minimiser les liaisons non spécifiques.
• Validez l’expression dans des lignées cellulaires humaines connues pour être positives au CD117 (par ex. TF-1, HMC-1) ou dans des cellules hématopoïétiques primaires.
• Étant donné que le CD117 peut être internalisé après stimulation par le ligand, tenez compte du moment de la fixation et de la coloration lors de l’analyse de cellules activées.

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