Pan-Akt Rabbit mAb pour Western Blot, IP, IF, IHC-P, ELISA - P31749 / P31751 / Q9Y243

Spécifications et paramètres clés du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de Pan-Akt

• AKT1 est l'une des trois sérine/thréonine kinases étroitement apparentées (AKT1/PKBα, AKT2/PKBβ, AKT3/PKBγ) qui partagent une grande similitude structurelle et des spécificités de substrats qui se chevauchent, régulant collectivement des processus cellulaires critiques.
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• Agissant en aval de PI3K, AKT médie la signalisation de l'insuline et des facteurs de croissance (IGF1, EGF, PDGF) pour contrôler le métabolisme, la croissance cellulaire, la prolifération, la survie et l'angiogenèse.
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• AKT favorise la survie cellulaire en phosphorylant et inactivant directement des facteurs pro-apoptotiques, notamment MAP3K5/ASK1 (Ser83) et BAD, et en activant des facteurs de transcription tels que CREB1 et NF-κB.
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• Par phosphorylation de TSC2 et DEPDC5/CASTOR1, AKT stimule l'activité de mTORC1, favorisant la synthèse des protéines et inhibant l'autophagie.
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• AKT phosphoryle FOXO1, FOXO3 et FOXO4, déclenchant leur liaison aux protéines 14-3-3 et leur rétention cytoplasmique, supprimant ainsi la transcription des gènes pro-apoptotiques.
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• La protéine se localise dans le cytoplasme, le noyau, la membrane cellulaire et l'espace intermembranaire mitochondrial, facilitant une signalisation dépendante du contexte ; elle est exprimée de manière ubiquitaire et fréquemment suractivée dans des cancers tels que le carcinome de la prostate et du sein.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Le poids moléculaire attendu pour Pan-Akt est d'environ 56 kDa ; une bande unique ou plusieurs bandes correspondant à différentes isoformes peuvent être observées en fonction de la lignée cellulaire et des conditions de traitement.
• Pour le transfert Western (Western Blot, WB), envisagez de commencer avec une dilution de 1:1000 et d'optimiser en fonction de l'abondance de la cible dans votre échantillon.
• Pour l'immunoprécipitation (IP), utilisez 2-5 µg d'anticorps pour 500 µg de lysat protéique total ; validez avec des témoins positifs et négatifs appropriés.
• En immunofluorescence (IF/ICC) et immunohistochimie (IHC-P), optimisez la fixation et la perméabilisation, et testez des dilutions entre 1:50 et 1:200.
• Les applications ELISA peuvent nécessiter un appariement avec un anticorps de détection approprié ; assurez-vous que l'anticorps reconnaît la protéine native dans les conditions de l'essai.
• Une réactivité croisée a été rapportée pour Akt humain, souris et rat ; si vous utilisez d'autres espèces, vérifiez l'homologie de séquence dans la région de l'immunogène (résidus 1-123 d'Akt1 humain).
• L'anticorps reconnaît les trois isoformes d'AKT ; pour des études spécifiques aux isoformes, confirmez la spécificité avec des contrôles génétiques ou des inhibiteurs spécifiques.

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