Anticorps polyclonal de lapin NLRP3 pour WB, IF/ICC, ELISA - Q96P20

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation du NLRP3

• NLRP3 (protéine contenant les domaines NACHT, LRR et PYD 3), également connu sous le nom de cryopyrine, CIAS1 ou NALP3, est un membre de la famille des récepteurs de type NOD (NLR), caractérisé par un domaine pyrine N-terminal (PYD), un domaine NACHT central et des répétitions riches en leucine C-terminales (LRR).
• En tant que composant détecteur de l'inflammasome NLRP3, il orchestre le recrutement de l'ASC (PYCARD) et de la pro-caspase-1, conduisant à l'activation de la caspase-1, qui clive la pro-IL-1β et la pro-IL-18 en cytokines matures et déclenche la pyroptose médiée par la gasdermine-D.
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• NLRP3 répond à un large éventail de stimuli, notamment l'ATP extracellulaire, la nigericine, les cristaux d'urate monosodique, les cristaux de cholestérol, les fibrilles d'amyloïde-β et les particules environnementales ; ces signaux induisent une efflux de potassium et une perturbation membranaire, entraînant la translocation du NLRP3 vers le centre d'organisation des microtubules (MTOC) et le réseau trans-Golgi dispersé (dTGN), où il se lie au phosphatidylinositol 4-phosphate (PtdIns4P) via sa région polybasique, facilitant l'assemblage de l'inflammasome.
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• Principalement exprimé dans les macrophages, et également détecté dans les cellules dendritiques, les cellules B et T, les granulocytes, les cellules épithéliales pulmonaires, les chondrocytes et les épithéliums squameux stratifiés (buccal, œsophagien, ectocervical et vésical).
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• Les mutations gain-de-fonction de NLRP3 sont responsables des syndromes périodiques associés à la cryopyrine (CAPS), englobant le syndrome auto-inflammatoire familial au froid, le syndrome de Muckle-Wells et la CINCA/NOMID, et sont associées à la surdité et à l'amyloïdose systémique.
• La localisation subcellulaire comprend le cytosol, le complexe de l'inflammasome, la membrane de l'appareil de Golgi, le réticulum endoplasmique, les mitochondries, et il peut être sécrété ou trouvé dans le noyau dans certaines conditions.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène s'étend sur les acides aminés 100 à 210, ce qui se situe dans le domaine PYD du NLRP3 humain ; cette région est relativement conservée entre les espèces, ce qui est cohérent avec la réactivité croisée observée avec les orthologues de souris et de rat.
• Le Western blot est censé montrer une bande unique à environ 118 kDa dans les lysats cellulaires totaux de macrophages ou d'autres cellules exprimant NLRP3.
• Pour les témoins positifs, envisagez d'utiliser des cellules humaines THP‑1 traitées au LPS ou des macrophages dérivés de la moelle osseuse de souris, connus pour réguler à la hausse le NLRP3.
• En IF/ICC, les conditions de perméabilisation et de fixation peuvent nécessiter une optimisation ; l'inclusion d'échantillons non stimulés par rapport à stimulés peut aider à visualiser la formation de specks d'inflammasome.
• Validez les performances de l'anticorps dans votre type d'échantillon et votre application spécifiques, car la nature polyclonale peut entraîner une variabilité d'un lot à l'autre ; des tests pilotes avec des témoins appropriés sont recommandés.

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