Anticorps polyclonal de lapin anti-NLRP3 pour WB, IF/ICC, ELISA - Q8R4B8

Spécifications et paramètres essentiels du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de NLRP3

• NLRP3 (protéine 3 contenant les domaines NACHT, LRR et PYD, également connue sous le nom de cryopyrine) est un capteur intracellulaire qui constitue le composant central de l'inflammasome NLRP3. Celui-ci assure l'activation en réponse aux défauts d'intégrité membranaire, entraînant la sécrétion d'IL1B et d'IL18 ainsi que la pyroptose. Références associées : PMID:19362020, PMID:23582325, PMID:26642356

• NLRP3 initie la formation d'un complexe inflammasome polymérique avec CASP1 et PYCARD/ASC, qui active la caspase-1 afin de cliver pro-IL1B, pro-IL18 et la gasdermine-D (GSDMD), entraînant la libération de cytokines et la mort cellulaire pyroptotique. Références associées : PMID:16407889, PMID:18403674, PMID:19362020, PMID:16546100, PMID:17008311, PMID:26642356

• Divers stimuli associés aux agents pathogènes et aux dommages, notamment l'ATP extracellulaire, la nigéricine, les cristaux (d'urate et de cholestérol), l'amyloïde-bêta et les particules (amiante et silice), déclenchent l'activation de NLRP3, presque tous convergeant vers un efflux intracellulaire de K+. Références associées : PMID:16407888, PMID:16407889, PMID:16407890, PMID:23809161

• L'activation de l'inflammasome NLRP3 est également nécessaire à la sécrétion de HMGB1 et régule une réponse homéostatique de cicatrisation qui dirige la migration des neutrophiles vers les sites nécrotiques sans endommager les tissus sains. Références associées : PMID:22801494, PMID:20947763

• Lorsqu'il est activé, NLRP3 est transporté vers le centre organisateur des microtubules (MTOC), puis vers des vésicules dispersées du réseau trans-golgien (dTGN), où il se lie au phosphatidylinositol 4-phosphate (PtdIns4P) et assemble des inflammasomes actifs, un processus rendu possible par NEK7. Références associées : PMID:26814970, PMID:34615873, PMID:34861190, PMID:30487600

• NLRP3 est fortement exprimé dans les leucocytes du sang périphérique (lymphocytes Th2 et macrophages) et à de faibles niveaux dans les ostéoblastes, ce qui concorde avec ses fonctions immunologiques et inflammatoires. Références associées : PMID:15302403, PMID:16546100, PMID:26098997, PMID:28847925, PMID:17907925

• Indépendamment de sa fonction de charpente de l'inflammasome, NLRP3 agit comme régulateur transcriptionnel dans les cellules Th2, en se liant à l'ADN et en modulant l'expression d'IL4, d'IL5, d'IL13 et d'autres gènes essentiels à la différenciation Th2 et à l'inflammation allergique. Références associées : PMID:26098997

• NLRP3 possède une activité ATPase intrinsèque et est régulé par diverses modifications post-traductionnelles, notamment la phosphorylation, la palmitoylation et l'ubiquitination, qui contrôlent son seuil d'activation et ses interactions. Références associées : PMID:34861190

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L'immunogène couvre les acides aminés 1–93 de NLRP3 de souris, une région contenant le domaine pyrine (PYD). Notez que l'anticorps peut détecter à la fois la protéine de pleine longueur et les fragments contenant le domaine PYD ; validez la spécificité dans votre système modèle.
• Pour le Western blot, le poids moléculaire prédit est d'environ 118 kDa ; toutefois, les modifications post-traductionnelles peuvent entraîner l'apparition de bandes supplémentaires. Utilisez des contrôles positifs et négatifs appropriés (par exemple, des lysats de macrophages stimulés par LPS+ATP) et optimisez les pourcentages de gel pour les protéines de haut poids moléculaire.
• En immunofluorescence/immunocytochimie (IF/ICC), NLRP3 peut présenter un marquage ponctué ou diffus selon son état d'activation. Les conditions de fixation et de perméabilisation doivent être optimisées afin de préserver sa localisation native.
• Pour les applications ELISA, l'association avec un autre anticorps spécifique de NLRP3 peut être nécessaire pour les formats sandwich ; la nature polyclonale peut être avantageuse pour la capture ou la détection.

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