Ac NFKB1 de lapin pour WB, IF/ICC, ELISA - P19838

Spécifications et paramètres essentiels du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de NFKB1

• NFKB1 code la protéine précurseur p105 et sa sous-unité p50 issue de son clivage protéolytique (facteur nucléaire NF-kappa-B p50). Alors que p105 fonctionne comme un inhibiteur de type IκB qui retient les dimères de NF-κB dans le cytoplasme, la génération de p50 permet la liaison à l'ADN et la régulation transcriptionnelle. Références associées : PMID:1423592
• La sous-unité p50 active s'associe à RELA/p65 pour former l'hétérodimère p65-p50, un puissant activateur transcriptionnel qui se lie à la séquence consensus κB 5'-GGRNNYYCC-3' dans les amplificateurs des gènes cibles. Références associées : PMID:1740106, PMID:7830764
• Les complexes NF-κB sont généralement séquestrés dans le cytoplasme par les inhibiteurs IκB. L'activation canonique implique la phosphorylation médiée par la kinase IκB (IKK), suivie de la dégradation protéasomale de IκB, ce qui libère NF-κB et permet sa translocation vers le noyau.
• NF-κB est un facteur de transcription pléiotrope présent dans presque tous les types cellulaires. Il agit comme un médiateur central des réponses immunitaires et inflammatoires, ainsi que de la survie, de la prolifération et de l'apoptose cellulaires.
• L'homodimère p50-p50 fonctionne comme un répresseur transcriptionnel, sauf lorsqu'il est associé à BCL3, qui le transforme en activateur. Ainsi, la composition des dimères détermine l'expression des gènes cibles.
• NFKB1 est principalement localisé dans le cytoplasme des cellules au repos, mais il se déplace vers le noyau lors de l'activation, ce qui est cohérent avec son rôle de facteur sensible aux signaux.
• De nombreuses modifications post-traductionnelles, notamment la phosphorylation, l'acétylation et l'ubiquitination, ajustent finement la stabilité de NFKB1, son activité de liaison à l'ADN et son activité transcriptionnelle.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L'immunogène (acides aminés 41–365) se situe dans le domaine d'homologie Rel N-terminal conservé entre p105 et p50. En western blot, les bandes correspondant à p105 pleine longueur (environ 105 kDa) et à p50 transformée (environ 50 kDa) peuvent toutes deux apparaître ; confirmez l'identité des bandes à l'aide d'extraits cellulaires et de traitements appropriés.
• Pour l'immunofluorescence/ICC, NFKB1 est principalement cytoplasmique dans les conditions basales ; une stimulation par le TNF-α ou l'IL-1β peut induire une translocation nucléaire rapide. Incluez des témoins non traités afin de visualiser la redistribution subcellulaire.
• Lors de la réalisation d'un ELISA, envisagez d'utiliser une protéine NFKB1 (p50) recombinante et des anticorps de détection appariés afin de valider la spécificité et la sensibilité. Optimisez les conditions de revêtement et de blocage en fonction du format de votre test.
• Comme il s'agit d'un anticorps polyclonal, la cohérence entre les lots doit être vérifiée à l'aide d'un lysat témoin positif standard ou d'une protéine recombinante.

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