Anticorps polyclonal de lapin MonoMethyl-YAP1-K342 (P46937) pour WB et ELISA

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de YAP1

• YAP1 (Yes-associated protein 1) agit comme un coactivateur et un corépresseur transcriptionnel, étant un effecteur en aval central de la voie de signalisation Hippo. Cette voie régule de manière critique la taille des organes et supprime la tumorigenèse en limitant la prolifération cellulaire et en favorisant l'apoptose (PMID:17974916, PMID:18280240, PMID:18579750, PMID:21364637, PMID:30447097). Références associées : PMID:17974916, PMID:18280240, PMID:18579750, PMID:21364637, PMID:30447097.
• La phosphorylation par les kinases LATS1/2 séquestre YAP1 dans le cytoplasme, empêchant sa translocation nucléaire et l'activation subséquente de la transcription dépendante de TEAD. Cette régulation dépendante de la phosphorylation est centrale dans son rôle de contrôle de la croissance cellulaire, de la croissance indépendante de l'ancrage et de la transition épithélio-mésenchymateuse (EMT) (PMID:18158288, PMID:26598551, PMID:34404733). Références associées : PMID:18158288, PMID:26598551, PMID:34404733.
• YAP1 est soumis à de nombreuses modifications post-traductionnelles, notamment la phosphorylation sur de multiples résidus sérine, thréonine et tyrosine, ainsi que l'ubiquitination et la méthylation. La méthylation de la lysine 342 (K342) est une modification spécifique que cet anticorps reconnaît. Bien que non largement caractérisée dans UniProt, la méthylation à ce site pourrait influencer les interactions ou la stabilité de YAP1, ajoutant une autre couche de régulation de la voie Hippo.
• La localisation subcellulaire de YAP1 est régulée de manière dynamique ; elle se localise principalement dans le noyau à faible densité cellulaire et se transloque dans le cytoplasme à haute densité cellulaire, un processus modulé par la phosphorylation. YAP1 s'associe également aux jonctions serrées et à la membrane cellulaire en réponse à des signaux mécaniques (PMID:18158288, PMID:20048001, PMID:31835537, PMID:25849865). Références associées : PMID:18158288, PMID:20048001, PMID:31835537, PMID:25849865.
• L'analyse de l'expression spécifique aux tissus révèle des niveaux accrus de YAP1 dans certains cancers du foie et de la prostate, soulignant son potentiel oncogénique. De plus, des isoformes dépourvues du domaine de transactivation sont détectées dans les neurones du striatum de patients atteints de la maladie de Huntington (PMID:16461361, PMID:17974916, PMID:7782338). Références associées : PMID:16461361, PMID:17974916, PMID:7782338.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Cet anticorps a été généré contre un peptide synthétique monométhylé correspondant aux résidus entourant K342 de YAP1 humain, le rendant spécifique de la forme méthylée. Pour une détection optimale en WB, envisagez d'utiliser des protocoles de fractionnement nucléaire et cytoplasmique pour enrichir YAP1, car sa localisation affecte son abondance.
• Lors de la réalisation d'ELISA, incluez un contrôle avec un peptide non méthylé pour confirmer la spécificité. Une approche ELISA compétitive avec des peptides méthylés et non méthylés peut aider à valider la spécificité du signal.
• Une réactivité croisée est prédite pour la souris et le rat sur la base de l'homologie des séquences ; cependant, validez la réactivité dans le tissu ou la lignée cellulaire pertinent(e) avant des expériences à grande échelle.
• Pour le WB, les conditions de blocage et de détection standard sont adaptées ; cependant, si des bandes non spécifiques apparaissent, envisagez d'optimiser la dilution de l'anticorps (par exemple, 1:500-1:2000) et la composition du tampon de blocage.

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