Anticorps polyclonal de lapin anti-Histone H4-R3 monométhylée | P62805 | WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'histone H4

L'histone H4 est un composant central du nucléosome, autour duquel environ 147 paires de bases d'ADN génomique sont enroulées. En tant que partie de l'octamère d'histones, elle joue un rôle essentiel dans la régulation de la transcription, de la réplication de l'ADN, de la réparation et de la stabilité chromosomique. La modification post-traductionnelle dynamique des histones, collectivement appelée "code histone", régit la structure de la chromatine et l'expression des gènes. Références connexes : UniProt P62805

L'histone H4 est principalement nucléaire et s'associe aux chromosomes tout au long du cycle cellulaire. L'histone H4 acétylée a été spécifiquement observée dans le noyau des spermatides au stade 11, indiquant un rôle dans la compaction de la chromatine pendant la spermatogenèse. Références connexes : UniProt P62805

La queue N-terminale de l'histone H4 est soumise à des modifications post-traductionnelles étendues, notamment l'acétylation, la méthylation, la phosphorylation, la citrullination et divers événements d'acylation. L'arginine 3 (R3 ; correspondant à R4 dans la protéine mature après élimination de la méthionine initiateur) est un résidu clé qui peut être monométhylé, diméthylé de manière asymétrique (par PRMT1), diméthylé de manière symétrique (par PRMT5/PRMT7) ou converti en citrulline. L'anticorps présent reconnaît spécifiquement la forme monométhylée de l'histone H4 sur l'arginine 3. Références connexes : PMID:11387442, PMID:11448779, PMID:15345777, PMID:16567635

Guide expérimental et conseils techniques

• Conception de l'immunogène : L'anticorps a été généré contre un peptide synthétique monométhylé correspondant à l'arginine 3 de l'histone H4 humaine (NP_003529.1). Lors de l'évaluation de la spécificité, envisagez des tests de compétition par peptide ou des dot blots avec des peptides modifiés différemment pour confirmer la reconnaissance sélective de la monométhylation par rapport à l'arginine 3 non modifiée ou diméthylée.
• Western blot (WB) : L'histone H4 a un poids moléculaire prédit d'environ 11 kDa ; des gels SDS-PAGE à pourcentage élevé (15% ou gradient) sont recommandés pour une résolution optimale. Les extraits nucléaires ou les histones extraites à l'acide donnent généralement des signaux plus forts. En raison de la petite taille, vérifiez l'efficacité du transfert et utilisez des membranes appropriées (par exemple, PVDF 0,2 µm).
• Immunohistochimie (IHC-P) et immunocytochimie/immunofluorescence (IF/ICC) : Un profil de marquage nucléaire prédominant est attendu. La récupération antigénique (par exemple, tampon citrate, pH 6,0) pour les coupes incluses en paraffine et la perméabilisation par détergent pour les cellules doivent être optimisées. La réactivité croisée de l'anticorps avec les tissus de souris et de rat le rend adapté à l'étude des modifications des histones dans divers systèmes modèles.
• ELISA : Le peptide monométhylé peut être utilisé comme antigène de recouvrement pour un ELISA direct ou compétitif afin de quantifier l'affinité de liaison et la spécificité de l'anticorps. Les facteurs de dilution doivent être titrés en fonction du format de test.
• Réactivité croisée inter-espèces : Il est rapporté que l'anticorps reconnaît l'histone H4 humaine, de souris et de rat, avec une large gamme d'autres espèces prédites en raison de la conservation extrême de la séquence de l'histone H4. Pour les espèces non testées, vérifiez l'homologie de séquence peptidique au niveau de la région immunogène.
• Considérations sur les anticorps polyclonaux : En tant qu'anticorps polyclonal de lapin, une variabilité de titre et de bruit de fond d'un lot à l'autre peut survenir. Incluez des témoins positifs et négatifs appropriés et re-validez chaque nouveau lot dans vos conditions expérimentales.

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