pAb Lapin anti-MonoMethyl-Histone H4-K5 (P62805) pour IF/ICC et ELISA

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'Histone H4

• Fonction : L'Histone H4 est un composant central du nucléosome, enveloppant et compactant l'ADN en chromatine. Cela limite l'accessibilité de l'ADN et joue un rôle central dans la régulation de la transcription, la réparation de l'ADN, la réplication de l'ADN et la stabilité chromosomique. Les nucléosomes sont constitués de deux copies de chacune des histones H2A, H2B, H3 et H4, formant un octamère autour duquel 147 paires de bases d'ADN sont enroulées. Le code histone, médié par des modifications post-traductionnelles, régule l'accessibilité de l'ADN et le remodelage des nucléosomes. Références associées : UniProtKB P62805

• Localisation subcellulaire : L'Histone H4 est principalement localisée dans le noyau et associée aux chromosomes. L'acétylation peut influencer sa distribution subnucléaire ; par exemple, l'H4 acétylée se localise dans le noyau des spermatides au stade 11. Références associées : UniProtKB P62805

• Modifications post-traductionnelles : L'Histone H4 subit de nombreuses modifications post-traductionnelles, en particulier sur sa queue N-terminale. L'acétylation se produit sur plusieurs lysines (par ex. K6, K9, K13, K17, K32, K92 ; voir PMID:19608861). La méthylation est observée sur l'arginine 4 (diméthylation asymétrique par PRMT1 ; PMID:11387442) et la lysine 21 (monométhylation ; PMID:12086618). La monométhylation sur la lysine 5 (K5me1) est une marque épigénétique spécifique reconnue par diverses protéines "lectrices" et impliquée dans la régulation transcriptionnelle. D'autres modifications incluent la phosphorylation, la citrullination et l'ubiquitination, formant collectivement un code régulateur complexe. Références associées : PMID:19608861, PMID:11387442, PMID:12086618

Guide expérimental et conseils techniques

• Conception de l'immunogène : Cet anticorps a été produit contre un peptide synthétique correspondant à la région N-terminale de l'Histone H4 humaine monométhylée sur K5. Lors de la conception d'anticorps similaires, assurez-vous que le peptide est de haute pureté et que la modification est confirmée par spectrométrie de masse. Envisagez d'utiliser un peptide non méthylé comme contrôle négatif dans vos tests pour vérifier la spécificité.
• IF/ICC : Pour l'immunofluorescence, une fixation standard au paraformaldéhyde à 4% et une perméabilisation au Triton X-100 à 0,1-0,5% sont généralement adaptées. Bloquez la liaison non spécifique avec 5% de BSA ou de sérum. L'accessibilité de l'épitope peut varier ; l'optimisation de la récupération antigénique peut être envisagée. Les protéines histones étant nucléaires, attendez-vous à une coloration nucléaire. Incluez des témoins sans anticorps primaire pour évaluer le bruit de fond.
• ELISA : Pour le revêtement, diluez l'anticorps ou l'antigène dans un tampon carbonate/bicarbonate (pH 9,6). Titrez la concentration d'anticorps pour déterminer le rapport signal/bruit optimal. Utilisez le peptide monométhylé comme contrôle positif et le peptide non modifié comme contrôle négatif pour confirmer la spécificité.
• Généralités : Comme pour tout anticorps spécifique d'une modification, des variations entre lots peuvent survenir ; validez les nouveaux lots dans votre système expérimental spécifique. La réactivité croisée est prédite pour l'humain, la souris et le rat sur la base de la conservation de la séquence ; testez sur l'espèce qui vous intéresse.

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