Anticorps polyclonal de lapin contre MonoMéthyl-Histone H3-R2 (Q16695/P68431) | WB, IF/ICC, ELISA

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'histone H3 (H3.1/H3.1t)

• L'histone H3 est un composant clé du nucléosome, qui enroule et compacte l'ADN dans la chromatine. Ce processus limite l'accessibilité de l'ADN et joue un rôle central dans la régulation de la transcription, la réparation de l'ADN, la réplication de l'ADN et la stabilité chromosomique. L'accessibilité de l'ADN est contrôlée par le "code histone" — un ensemble complexe de modifications post-traductionnelles (MPT) et de remodelage des nucléosomes.
• La protéine se localise dans le noyau et sur les chromosomes.
• Deux isoformes majeures sont concernées : l' H3.1 (codé par plusieurs gènes, par ex. H3C1, H3C2, etc., UniProt P68431) est exprimé dans la plupart des cellules somatiques, tandis que l'H3.1t (H3-4, HIST3H3, UniProt Q16695) est spécifique des testicules.
• La queue N-terminale de l'histone H3 est sujette à de nombreuses MPT, incluant l'acétylation, la méthylation, la phosphorylation, la citrullination et d'autres. Plus spécifiquement, l'arginine 2 (R2) peut être méthylée. La diméthylation asymétrique sur ce site est catalysée par PRMT6 et est associée à la régulation transcriptionnelle. La monométhylation sur R2 est une étape intermédiaire qui peut avoir des rôles fonctionnels distincts. Cet anticorps reconnaît spécifiquement la forme monométhylée de R2. Références associées : PMID:17898714, PMID:18077460, PMID:18079182

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène est un peptide monométhylé synthétique correspondant à la région du R2 de l'histone H3 humaine. Pour le western blot (WB), nous recommandons d'utiliser des extraits nucléaires ou des préparations enrichies en histones pour augmenter le signal. Le poids moléculaire prévu est d'environ 15 kDa, mais les bandes peuvent apparaître légèrement plus hautes en raison des MPT ou des interactions protéiques.
• Pour l'immunofluorescence / immunocytochimie (IF/ICC), les conditions de fixation et de perméabilisation peuvent nécessiter une optimisation. Comme l'histone H3 est nucléaire, la perméabilisation avec du Triton X-100 ou du méthanol est recommandée. Validez le profil de coloration par rapport à des marqueurs nucléaires de référence.
• En ELISA, nous conseillons d'utiliser un peptide méthylé comme antigène de revêtement pour confirmer la spécificité pour le R2 monométhylé par rapport aux formes non modifiées ou diméthylées.
• La réactivité croisée inter-espèces est prévue comme large (humain, souris, rat et autres), mais il est conseillé de vérifier la réactivité dans le système d'échantillon spécifique étudié, en particulier pour les espèces non mammifères.
• En tant qu'anticorps polyclonal de lapin, la cohérence entre lots doit être évaluée pour les essais quantitatifs critiques. L'inclusion de contrôles positifs et négatifs appropriés (par exemple, compétition par peptide monométhylé) permet d'améliorer la fiabilité des données.

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