mAb de lapin contre MonoMéthyl-Histone H3-K9 | Q16695 / P68431 – Anticorps spécifique de la méthylation pour WB, ChIP, ELISA et plus

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'histone H3

L'histone H3 est un composant central du nucléosome, l'unité répétitive fondamentale de la chromatine. Elle joue un rôle central dans la compaction de l'ADN et la régulation de son accessibilité pour les machineries de transcription, réplication et réparation.

Une caractéristique clé de la biologie de l'histone H3 est l'hypothèse du « code histone » : des combinaisons spécifiques de modifications post-traductionnelles (PTM) sur sa queue N-terminale flexible gouvernent des états de chromatine distincts et des processus nucléaires en aval. Parmi ces PTM, la méthylation de la lysine 9 (H3K9me) est l'une des marques les plus étudiées, souvent associée à la répression transcriptionnelle, la formation d'hétérochromatine et la stabilité génomique.

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La lysine en position 9 de la protéine H3 mature (correspondant à la position 10 d'UniProt) peut exister dans différents états de méthylation : mono-, di- ou triméthylée, chacun ayant des conséquences biologiques distinctes. La H3K9 monométhylée (H3K9me1) est principalement enrichie au niveau des promoteurs et des enhancers de gènes actifs dans les régions euchromatiques, où elle ajuste l'activité transcriptionnelle, bien qu'elle ait également été détectée au niveau de l'hétérochromatine péricentrique dans des contextes cellulaires spécifiques.

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L'histone H3 existe sous forme de plusieurs variants codés par des gènes différents. L'histone canonique H3.1 (SWISS P68431) est exprimée de manière dépendante de la réplication et est incorporée dans la chromatine pendant la phase S, tandis que le variant H3.1t/H3-4 (Q16695) spécifique des testicules est exprimé uniquement dans les cellules testiculaires et pourrait contribuer à la dynamique chromatinienne spécifique de la spermatogenèse. L'épitope de cet anticorps couvre une région très conservée chez tous les variants de H3, permettant une détection large.

Références associées : Aucune (spécificité tissale basée sur les données de séquence)

Subcellulairement, l'histone H3 est localisée dans le noyau et étroitement associée à l'ADN chromosomique.

Cet anticorps reconnaît spécifiquement la forme monométhylée de H3K9. En raison de la nature conservée du site de modification, une réaction avec de multiples espèces et sous-types de H3 est prédite.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• Préparation d'échantillon pour WB : Envisagez d'utiliser des histones extraites à l'acide ou des lysats enrichis en fractions nucléaires pour améliorer le rapport signal sur bruit. Pour les lysats cellulaires totaux, ajoutez des cocktails d'inhibiteurs de protéases appropriés et évitez les conditions de dénaturation qui pourraient éliminer les modifications des histones.
• Validation de la spécificité : Dans tout essai, confirmez la spécificité de l'anticorps en utilisant des peptides K9 synthétiques monométhylés vs non méthylés dans une expérience de compétition peptidique (dot blot ou ELISA). Une puce de protéines d'histone H3 recombinante avec des états de méthylation définis peut également servir de contrôle rigoureux.
• Optimisation pour ChIP : Pour l'immunoprécipitation de la chromatine, le temps de réticulation, la quantité d'anticorps et les conditions de sonication doivent être déterminés empiriquement. La haute avidité de l'anticorps pour la marque monométhylée peut nécessiter moins d'anticorps par réaction par rapport aux anticorps pan-H3. Incluez toujours un contrôle de blocage par peptide spécifique monométhylé.
• Considérations pour IHC et IF : La fixation et la récupération d'antigène peuvent influencer l'accessibilité de l'épitope. Pour IHC-P, les protocoles standard pour les échantillons fixés au formol et inclus dans la paraffine (FFPE) avec une étape de récupération d'antigène par la chaleur (tampon citrate, pH 6.0) donnent souvent de bons résultats ; cependant, des tests préliminaires sont recommandés. En immunofluorescence, une brève perméabilisation au méthanol peut améliorer la coloration nucléaire.
• Applications ELISA / dot blot : Recouvrez les plaques avec un peptide H3(1‑21) monométhylé ou une protéine H3K9me1 recombinante pleine longueur pour évaluer l'affinité de liaison et la linéarité. Utilisez un peptide conjugué à la BSA comme alternative.
• Réactivité croisée interspécifique : Bien qu'une large réactivité soit prédite, nous recommandons de valider l'anticorps dans votre système d'échantillon spécifique (par exemple souris, rat ou autre espèce pertinente) avant des expériences à grande échelle.

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