Anticorps monoclonal de lapin anti-MonoMethyl-Histone H3-K4 (Q16695/P68431) pour WB, ChIP, IF/ICC et la recherche épigénétique

Spécifications et paramètres clés du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'histone H3

L'histone H3 est un composant central du nucléosome, qui enroule et compacte l'ADN en chromatine. Cette compaction limite l'accessibilité de l'ADN aux machineries cellulaires qui l'utilisent comme matrice, jouant ainsi un rôle central dans la régulation de la transcription, la réparation de l'ADN, la réplication de l'ADN et la stabilité chromosomique. L'accessibilité de l'ADN est finement régulée par un ensemble complexe de modifications post-traductionnelles des histones, connues sous le nom de "code histone", et par le remodelage des nucléosomes.

L'histone H3 se localise dans le noyau et fait partie intégrante des chromosomes. Deux variantes sont pertinentes ici : l'histone H3.1 canonique (codée par de multiples gènes tels que H3C1, H3C2, etc., SWISS P68431) est exprimée de manière ubiquitaire, tandis que l'histone H3.1t (SWISS Q16695) est spécifique du testicule. Toutes deux partagent le même rôle fondamental dans la structure de la chromatine.

La lysine 4 de l'histone H3 (H3K4) est un site majeur pour diverses modifications post-traductionnelles, notamment la mono-, di- et triméthylation, l'acétylation et d'autres. La monométhylation de H3K4 (H3K4me1) est typiquement associée aux régions amplificatrices (enhancers) et à la transcription génique active. Cet anticorps a été produit contre un peptide monométhylé entourant H3K4, conférant une spécificité pour cet état de modification.

Références connexes : PMID:16267050, PMID:16457588, PMID:17194708.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Cet anticorps est spécifique de H3K4 monométhylée. Pour des résultats optimaux, incluez des échantillons témoins positifs et négatifs (par exemple, des peptides avec K4 non modifié, mono-, di- ou tri-méthylé) pour confirmer la spécificité.
• Western Blot (WB) : Utilisez des extraits nucléaires ou des lysats cellulaires totaux. Une bande d'environ 16 kDa est attendue. Déterminez empiriquement la dilution optimale de l'anticorps primaire (par exemple, plage de départ 1:500–1:2000) et associez-la à un anticorps secondaire conjugué à la HRP approprié.
• Immunoprécipitation de la chromatine (ChIP) : Adapté pour le ChIP. Réticulez la chromatine, fragmentez-la et immunoprécipitez avec l'anticorps. Validez l'enrichissement par qPCR au niveau de locus cibles connus pour H3K4me1.
• Immunofluorescence (IF/ICC) : Fixez et perméabilisez les cellules de manière appropriée. Une coloration nucléaire exclusive est attendue. Contre-colorez avec du DAPI ou similaire pour confirmer la localisation.
• IHC-P : Une récupération antigénique peut être nécessaire ; optimisez les conditions pour chaque type de tissu.
• Dot Blot (DB) et ELISA : Assurez-vous que la concentration en peptide et les conditions de blocage sont optimisées pour minimiser la liaison non spécifique.
• Réactivité croisée : Cet anticorps reconnaît un large éventail d'espèces, y compris les plantes (Arabidopsis, riz, blé). Pour les échantillons végétaux, adaptez les protocoles d'extraction en raison de la paroi cellulaire rigide et optimisez les conditions de détection.

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